Kvržice mahunarki. Nodule bakterija mahunarki

Paleontološki dokazi sugeriraju da su najstarije mahunarke koje su imale kvržice bile neke biljke koje pripadaju grupi Eucaesalpinioideae.

U modernim vrstama mahunarki na korijenima mnogih članova porodice Papilionaceae pronađene su nodule.

Filogenetski primitivniji predstavnici porodica kao što su Caesalpiniaceae, Mimosaceae, u većini slučajeva ne formiraju kvržice.

Od 13.000 vrsta (550 rodova) mahunarki, prisustvo nodula je do sada utvrđeno samo kod otprilike 1300 vrsta (243 roda). Ovo prvenstveno uključuje biljne vrste koje se koriste u poljoprivredi (više od 200).

Nakon formiranja kvržica, mahunarke stiču sposobnost apsorpcije atmosferskog dušika. Međutim, oni se mogu hraniti vezanim oblicima dušika - amonijevim solima i dušičnom kiselinom. Samo jedna biljka, Hedysarum coronarium, asimilira samo molekularni azot. Stoga, bez nodula u prirodi, ova biljka ne postoji.

Nodule bakterije opskrbljuju mahunarku dušikom koji se fiksira iz zraka. Biljke, zauzvrat, opskrbljuju bakterije proizvodima metabolizma ugljikohidrata i mineralnim solima koje su im potrebne za rast i razvoj.

Godine 1866., poznati botaničar i zemljoradnik M.S. Voronin vidio je najmanja "tijela" u čvorićima na korijenu mahunarki. Voronin je iznio hrabre pretpostavke za to vrijeme: povezao je stvaranje kvržica s djelovanjem bakterija, a pojačanu diobu stanica tkiva korijena s reakcijom biljke na bakterije koje su prodrle u korijen.

20 godina kasnije, holandski naučnik Beijerin izolovao je bakterije iz kvržica graška, grahorice, chiny, graha, seradele i lizalice i proučavao njihova svojstva, provjeravajući sposobnost da zaraze biljke i izazovu stvaranje kvržica. On je ove mikroorganizme nazvao Bacillus radicicola. Budući da bakterije koje formiraju spore pripadaju rodu Bacillus, a bakterije nodula nemaju tu sposobnost, A. Prazhmovsky ih je preimenovao u Bacterium radicicola. B. Frank je predložio uspješnije generičko ime za kvržične bakterije - Rhizobium (od grčkog rhizo - korijen, bio - život; život na korijenu). Ovaj naziv se ukorijenio i još uvijek se koristi u literaturi.

Za označavanje vrste bakterija kvržica, uobičajeno je da se generičkom nazivu Rhizobium doda pojam koji odgovara latinskom nazivu biljne vrste iz čijih su kvržica izolirane i na kojima mogu formirati kvržice. Na primjer, Rhizobium trifolii - bakterija kvržica djeteline, Rhizobium lupini - bakterija kvržica vučije itd. U slučajevima kada su kvržice sposobne da formiraju kvržice na korijenu različitih vrsta mahunarki, odnosno da izazovu tzv. unakrsnu infekciju, naziv vrste je kao da je kolektivan - odražava upravo tu sposobnost "unakrsne zaraze". Na primjer, Rhizobium leguminosarum - bakterija kvržica graška (Pisum), leće (Lens), činova (Lathyrus).

Morfologija i fiziologija nodulnih bakterija. Nodule bakterije karakterizira nevjerojatna raznolikost oblika - polimorfizam. Mnogi istraživači su skrenuli pažnju na to kada su proučavali bakterije nodula u čistoj kulturi u laboratorijskim uslovima i tlu. Nodule bakterije mogu biti u obliku štapa i ovalne. Među ovim bakterijama postoje i filtrabilni oblici, L-oblici, kokoidno nepokretni i pokretni organizmi.

Mlade bakterije nodula u čistoj kulturi na hranljivim podlogama obično imaju oblik štapića (Sl. 143, 2, 3), veličina štapića je približno 0,5-0,9 X 1,2-3,0 mikrona, pokretne, množe se dijeljenjem. U štapićastim stanicama kvržičnih bakterija djeteline uočena je podjela ligacijom. Sa starenjem, ćelije u obliku štapa mogu krenuti u pupanje. Prema Gramu, ćelije se boje negativno, njihova ultrafina struktura je tipična za gram-negativne bakterije (Sl. 143, 4).

Starenjem bakterije kvržica gube pokretljivost i prelaze u stanje takozvanih opasana šipka. Ovo ime su dobili zbog izmjenjivanja gustih i labavih dijelova protoplazme u stanicama. Ispruganost ćelija se dobro detektuje kada se posmatra pod svetlosnim mikroskopom nakon tretmana ćelija anilinskim bojama. Gusti dijelovi protoplazme (pojas) su obojeni gore od prostora između njih. U luminiscentnom mikroskopu, trake su svijetlozelene, razmaci između njih ne svijetle i izgledaju tamno (Sl. 143, 1). Pojasevi se mogu nalaziti u sredini kaveza ili na krajevima. Zonacija ćelija je vidljiva i na dijagramima elektronske difrakcije, ako se preparat ne tretira kontrastnim agensima pre gledanja (Sl. 143, 3). Vjerojatno je s godinama bakterijska stanica ispunjena masnim inkluzijama koje ne percipiraju boju i, kao rezultat, uzrokuju prugaste ćelije. Faza "pojasanih štapića" prethodi fazi formiranja bakteroida - ćelija nepravilnog oblika: zadebljale, razgranate, sferične, kruškolike i tikvice (sl. 144). Termin "bakteroidi" je u literaturu uveo J. Brunhorst 1885. godine, primjenjujući ga na formacije neobičnog oblika, mnogo veće od štapićastih bakterijskih stanica, koje se nalaze u tkivima nodula.

,

Bakteroidi sadrže više granula volutina i karakterizira ih veći sadržaj glikogena i masti od ćelija u obliku štapa. Bakteroidi uzgojeni u umjetnim hranjivim podlogama i formirani u tkivima nodula fiziološki su istog tipa. Vjeruje se da su bakteroidi oblici bakterija s nepotpunim procesom diobe. Nepotpunom diobom stanica kvržičnih bakterija nastaju dihotomno granati oblici bakteroida. Broj bakteroida raste sa starenjem kulture; njihov izgled je olakšan iscrpljivanjem hranjivog medija, nakupljanjem metaboličkih proizvoda i unošenjem alkaloida u podlogu.

U starim (dvomjesečnim) kulturama nodulnih bakterija, pomoću elektronskog mikroskopa, moguće je identificirati jasno definirane sferne formacije u mnogim ćelijama (Sl. 145) - artrospore. Njihov broj u ćelijama varira od 1 do 5.

Kvržice različitih vrsta mahunarki rastu različitom brzinom na hranjivim podlogama. Brzorastuće bakterije uključuju rizobiju graška, djeteline, lucerne, krmnog pasulja, grahorice, sočiva, chiny, slatke djeteline, piskavice, graha, slanutka i ptičje noge; do spororastuće - kvržice vučije, soje, kikirikija, seradele, mungo, kravljeg graška, esparzeta, draka. Potpuno formirane kolonije brzorastućih kultura mogu se dobiti 3. - 4. dana inkubacije, kolonije spororastućih kultura - 7. - 8. dana.

Brzorastuće bakterije kvržica karakterizira peritrihijski raspored flagela, dok su spororastuće bakterije monotrihijalne (Tablica 42, 1-5).

Osim flagela, u stanicama kvržičnih bakterija formiraju se filamentozni i perlasti izrasli kada se uzgajaju na tekućim podlogama (tablice 42, 43). Njihova dužina doseže 8-10 mikrona. Obično se nalaze na površini ćelije peritrihijalno, sadrže od 4 do 10 ili više po ćeliji.

,

Kolonije brzorastućih korijenskih kvržica su boje pečenog mlijeka, često prozirne, sluzave, glatkih rubova, umjereno konveksne i na kraju rastu na površini agar podloge. Kolonije spororastućih bakterija su konveksnije, male, suhe, guste i u pravilu ne rastu na površini podloge. Sluz koju proizvode kvržice je složeno jedinjenje polisaharidnog tipa, koje uključuje heksoze, pentoze i uronske kiseline.

Nodule bakterije su mikroaerofili (razvijaju se s malim količinama kisika u okolišu), međutim, preferiraju aerobne uvjete.

Nodule bakterije koriste ugljikohidrate i organske kiseline kao izvor ugljika u hranljivim medijima, a razne mineralne i organske spojeve koji sadrže dušik kao izvor dušika. Kada se uzgajaju na podlozi s visokim sadržajem tvari koje sadrže dušik, bakterije kvržica mogu izgubiti sposobnost da prodru u biljku i formiraju kvržice. Stoga se bakterije kvržica obično uzgajaju na biljnim ekstraktima (bujon graha, graška) ili ekstraktima tla. Fosfor neophodan za razvoj mogu se dobiti bakterijama nodula iz mineralnih i organskih spojeva koji sadrže fosfor; mineralna jedinjenja mogu poslužiti kao izvor kalcijuma, kalijuma i drugih mineralnih elemenata.

Za suzbijanje strane saprofitne mikroflore pri izolaciji bakterija kvržica iz kvržica ili direktno iz tla, preporučuju se hranjive podloge s dodatkom kristalno ljubičice, tanina ili antibiotika.

Za razvoj većine kultura nodulnih bakterija potrebna je optimalna temperatura u rasponu od 24-26 °. Na 0° i 37°C rast prestaje. Obično se kulture nodulnih bakterija čuvaju u laboratorijskim uslovima na niskim temperaturama (2-4 °C).

Mnoge vrste bakterija kvržica sposobne su sintetizirati vitamine B, kao i tvari za rast kao što je heteroauxin (-indoloctena kiselina).

Sve bakterije kvržica su približno podjednako otporne na alkalnu reakciju podloge (pH = 8,0), ali nejednako osjetljive na kiselu.

Specifičnost, virulencija, kompetitivnost i aktivnost nodulnih bakterija.

koncept specifičnost nodusne bakterije - kolektivne. Karakterizira sposobnost bakterija da formiraju kvržice u biljkama. Ako govorimo o bakterijama kvržica općenito, onda je za njih stvaranje kvržica samo u skupini mahunarki već samo po sebi specifično - imaju selektivnost za mahunarke.

Međutim, ako uzmemo u obzir pojedine kulture kvržičnih bakterija, ispada da među njima ima i onih koje su sposobne zaraziti samo određenu, nekad veću, nekad manju, grupu mahunarki, te je u tom smislu specifičnost bakterija kvržica. je selektivna sposobnost u odnosu na biljku domaćina. Specifičnost bakterija kvržica može biti uska (bakterije kvržica djeteline inficiraju samo grupu djetelina - specifičnost vrste, a bakterije kvržica vučije čak se mogu okarakterizirati sortnom specifičnošću - inficiraju samo alkaloidne ili bezalkaloidne sorte lupine). Sa širokom specifičnošću, bakterije kvržica graška mogu inficirati biljke graška, brade i mahune, a bakterije kvržica graška i graška mogu inficirati biljke graška, odnosno sve ih karakterizira sposobnost „unakrsne zaraze“. Specifičnost nodulnih bakterija je u osnovi njihove klasifikacije.

Specifičnost nodulnih bakterija nastala je kao rezultat njihove dugotrajne adaptacije na jednu biljku ili grupu njih i genetskog prijenosa ovog svojstva. S tim u vezi, postoji i različita prilagodljivost bakterija kvržica na biljke unutar grupe unakrsne infekcije. Dakle, bakterije kvržica lucerne mogu formirati kvržice u slatkoj djetelini. Ipak, one su prilagođenije lucerni, a bakterije slatke djeteline su prilagođenije slatkoj djetelini.

U procesu zaraze korijenskog sistema mahunarki bakterijama kvržica, to je od velikog značaja virulencija mikroorganizmi. Ako specifičnost određuje spektar djelovanja bakterija, tada virulentnost nodulnih bakterija karakterizira aktivnost njihovog djelovanja unutar ovog spektra. Virulencija se odnosi na sposobnost bakterija kvržica da prodru u tkivo korijena, umnože se tamo i izazovu stvaranje kvržica.

Važnu ulogu igra ne samo sama sposobnost prodiranja u korijenje biljke, već i brzina tog prodiranja.

Da bi se utvrdila virulencija soja kvržičnih bakterija, potrebno je utvrditi njegovu sposobnost da izazove nastanak nodula. Kriterij virulencije bilo kojeg soja može biti minimalni broj bakterija koji osigurava snažniju infekciju korijena u odnosu na druge sojeve, što kulminira stvaranjem kvržica.

U tlu, u prisustvu drugih sojeva, virulentniji soj neće uvijek prvi zaraziti biljku. U ovom slučaju treba uzeti u obzir takmičarska sposobnost, koji često maskira svojstvo virulencije u prirodnim uslovima.

Neophodno je da virulentni sojevi imaju i kompetitivnost, odnosno da mogu uspješno konkurirati ne samo predstavnicima lokalne saprofitne mikroflore, već i drugim sojevima nodulnih bakterija. Pokazatelj konkurentnosti soja je broj nodula koje on formira kao postotak od ukupnog broja kvržica na korijenu biljke.

Važno svojstvo kvržičnih bakterija je njihovo aktivnost(efikasnost), odnosno sposobnost asimilacije molekularnog dušika u simbiozi sa mahunarkama i zadovoljavanja potreba biljke domaćina u njoj. Ovisno o tome u kojoj mjeri bakterije kvržica doprinose povećanju prinosa mahunarki (Sl. 146), one se obično dijele na aktivne (djelotvorne), neaktivne (nedjelotvorne) i neaktivne (nedjelotvorne).

Soj bakterija neaktivan za jednu biljku domaćina u simbiozi sa drugom vrstom mahunarki može biti prilično efikasan. Stoga, kada se karakteriše soj u smislu njegove efikasnosti, uvek treba naznačiti u odnosu na koju biljnu vrstu domaćina se manifestuje njegovo dejstvo.

Aktivnost nodulnih bakterija nije njihovo trajno svojstvo. Često u laboratorijskoj praksi dolazi do gubitka aktivnosti u kulturama nodulnih bakterija. U tom slučaju se ili gubi aktivnost cijele kulture, ili se pojavljuju pojedinačne ćelije sa niskom aktivnošću. Do smanjenja aktivnosti nodulnih bakterija dolazi u prisustvu određenih antibiotika, aminokiselina. Jedan od razloga za gubitak aktivnosti nodulnih bakterija može biti utjecaj faga. Pasiranjem, odnosno višekratnim prolaskom bakterija kroz biljku domaćina (prilagođavanje određenoj biljnoj vrsti), moguće je dobiti efikasne sojeve od neefikasnih.

Izlaganje y-zracima omogućava dobijanje sojeva sa povećanom efikasnošću. Poznati su slučajevi nastanka visoko aktivnih radiomutanta bakterija nodula lucerke iz neaktivnog soja. Upotreba jonizujućeg zračenja, koje direktno utiče na promjenu genetskih karakteristika ćelije, po svoj prilici, može biti obećavajuća tehnika u selekciji visoko aktivnih sojeva kvržičnih bakterija.

Infekcija biljke mahunarki bakterijama kvržica.

Da bi se osigurao normalan proces infekcije korijenskog sustava bakterijama kvržica, potrebno je imati prilično veliki broj živih bakterijskih ćelija u zoni korijena. Mišljenja istraživača o broju ćelija potrebnih da bi se osigurao proces inokulacije su različita. Tako je, prema američkom naučniku O. Allenu (1966), potrebno 500-1000 ćelija za inokulaciju biljaka sa malim sjemenom, a najmanje 70 000 ćelija po 1 sjemenu za inokulaciju biljaka s velikim sjemenom. Prema australskom istraživaču J. Vincentu (1966.), u trenutku inokulacije, svako sjeme treba sadržavati najmanje nekoliko stotina živih i aktivnih ćelija bakterija nodula. Postoje dokazi da pojedinačne ćelije mogu prodrijeti i u tkivo korijena.

Tokom razvoja korijenskog sistema mahunarke, umnožavanje kvržičnih bakterija na površini korijena stimulira se izlučivanjem korijena. Produkti razaranja korijenskih klobuka i dlačica također igraju važnu ulogu u obezbjeđivanju pogodnog supstrata kvržičastim bakterijama.

U rizosferi mahunarki, razvoj bakterija kvržica je oštro stimuliran, a kod žitarica se ovaj fenomen ne opaža.

Na površini korijena nalazi se sloj sluzave tvari (matriks), koji se formira bez obzira na prisustvo bakterija u rizosferi. Ovaj sloj je jasno vidljiv kada se pregleda u svjetlosno-optičkom mikroskopu (sl. 147). Kvržičaste bakterije nakon inokulacije obično navale na ovaj sloj i nakupljaju se u njemu (Sl. 148) zbog stimulativnog djelovanja korijena, koje se manifestira čak i na udaljenosti do 30 mm.

,

U tom periodu, koji prethodi unošenju bakterija kvržica u tkivo korijena, bakterije u rizosferi su izuzetno pokretne. U ranim studijama, u kojima je za istraživanje korišten svjetlosni mikroskop, bakterije nodula koje se nalaze u zoni rizosfere dobile su naziv schwermers (gonidija ili zoospore) - "rojenje". Koristeći Faereusovu metodu (1957), moguće je uočiti formiranje izuzetno brzih kolonija švermera u predjelu vrha korijena i korijenskih dlačica. Kolonije švermera postoje vrlo kratko - manje od jednog dana.

O mehanizmu penetracije nodusne bakterije u korijenu biljke postoje brojne hipoteze. Najzanimljivije od njih su sljedeće. Autori jedne od hipoteza navode da bakterije kvržica prodiru u korijen oštećenjem epidermalnog i kortikalnog tkiva (posebno na mjestima gdje se bočni korijeni granaju). Ova hipoteza postavljena je na osnovu istraživanja Brila (1888), koji je izazvao stvaranje kvržica u mahunarkama probijanjem korijena iglom koja je prethodno bila uronjena u suspenziju bakterija kvržica. Kao poseban slučaj, takav put implementacije je sasvim stvaran. Na primjer, kod kikirikija kvržice se pretežno nalaze u pazuhu grana korijena, što sugerira prodiranje kvržičnih bakterija u korijen kroz praznine tokom klijanja bočnih korijena.

Zanimljiva i ne neutemeljena hipoteza je prodiranje bakterija kvržica u tkivo korijena kroz korijenske dlačice. Većina istraživača prepoznaje prolazak bakterija kvržica kroz korijenske dlačice.

Sugestija P. Darta i F. Mercera (1965) vrlo je uvjerljiva da bakterije nodula prodiru u korijen u obliku malih (0,1-0,4 µm) kokoidnih stanica kroz intervale (0,3-0,4 µm) celulozne fibrilarne mreže. primarni omotač korijenskih dlačica. Elektronsko mikroskopske fotografije (sl. 149) površine korijena, dobivene metodom replike, i činjenica skupljanja ćelija bakterija kvržica u rizosferi leguminoza potvrđuju ovu poziciju.

Moguće je da bakterije nodula mogu prodrijeti u korijen kroz epidermalne stanice mladih vrhova korijena. Prema Prazhmovskyju (1889), bakterije mogu prodrijeti u korijen samo kroz mladu ćelijsku stijenku (od korijenskih dlačica ili epidermalnih stanica) i potpuno su nesposobne da prevladaju kemijski izmijenjeni ili plutasti sloj korteksa. Ovo može objasniti da se kvržice obično razvijaju na mladim dijelovima glavnog korijena i bočnim korijenima koji se pojavljuju.

Nedavno je hipoteza o auksinu dobila veliku popularnost. Autori ove hipoteze smatraju da bakterije nodula prodiru u korijen zbog stimulacije sinteze β-indoloctene kiseline (heteroauksina) iz triptofana, koji je uvijek prisutan u izlučevinama korijena biljaka. Slika 150.

Izvor β-indolioctene kiseline u trenutku infekcije biljke, očigledno, nisu samo biljke koje luče triptofan kroz korijenski sistem, koji mnoge vrste bakterija, uključujući korijenske kvržice, mogu pretvoriti u β-indolioctenu kiselinu. U sintezi heteroauksina mogu učestvovati i same bakterije nodula, a moguće i druge vrste mikroorganizama u tlu koji žive u zoni korijena.

Međutim, hipoteza o auksinu ne može se bezuslovno prihvatiti. Djelovanje heteroauksina je nespecifično i uzrokuje zakrivljenost korijenskih dlačica kod raznih biljnih vrsta, a ne samo kod mahunarki. Istovremeno, bakterije kvržica uzrokuju zakrivljenost korijenskih dlačica samo kod mahunarki, pokazujući prilično značajnu selektivnost. Kada bi razmatrani efekat odredila samo β-indolioctena kiselina, onda ne bi bilo takve specifičnosti. Osim toga, priroda promjena u korijenskim dlačicama pod utjecajem nodulnih bakterija je nešto drugačija nego pod utjecajem heteroauksina.

Također treba napomenuti da su u nekim slučajevima nezakrivljene korijenske dlačice izložene infekciji. Zapažanja pokazuju da je kod lucerke i graška 60-70% korijenskih dlaka uvijeno i uvijeno, a kod djeteline - oko 50%. Kod nekih vrsta djeteline ova reakcija je zabilježena u najviše 1/4 zaraženih dlaka. U reakciji zakrivljenosti, očigledno, stanje korijenske dlake je od velike važnosti. Rastuće korijenske dlake najosjetljivije su na djelovanje tvari koje proizvode bakterije.

Poznato je da bakterije kvržica uzrokuju omekšavanje zidova korijenskih dlačica. Međutim, ne stvaraju ni celulazu ni pektinolitičke enzime. S tim u vezi, sugerirano je da bakterije kvržica prodiru u korijen zbog lučenja sluzi polisaharidne prirode, što uzrokuje sintezu enzima poligalakturonaze ​​u biljkama. Ovaj enzim, uništavajući pektinske tvari, utječe na ljusku korijenskih dlačica, čineći je plastičnijom i propusnijom. U malim količinama, poligalakturonaza je uvijek prisutna u korijenskim dlačicama i, očigledno, uzrokujući djelomično otapanje odgovarajućih komponenti membrane, omogućava ćeliji da se rasteže.

Neki istraživači vjeruju da bakterije kvržica prodiru u korijen zahvaljujući satelitskim bakterijama koje proizvode pektinolitičke enzime. Ova hipoteza je postavljena na osnovu sljedećih činjenica. Prilikom mikroskopije korijenskih dlačica, mnogi istraživači su primijetili prisutnost svjetlosne mrlje u blizini koje se nakupljaju bakterije nodula. Ova mrlja može biti znak početka maceracije (destrukcije) tkiva protopektinazom, slično istom znaku koji se opaža kod biljaka kod mnogih bakterijskih bolesti. Osim toga, utvrđeno je da avirulentne kulture bakterija kvržica u prisustvu bakterija koje proizvode pektinolitičke enzime postaju sposobne prodrijeti u korijen.

Treba napomenuti još jednu hipotezu, prema kojoj bakterije kvržica ulaze u korijen prilikom formiranja prstasto izbočine na površini korijenske dlake. Difrakcija elektrona presjeka korijenske dlake koja potvrđuje ovu hipotezu (sl. 150, 3) pokazuje korijensku dlaku savijenu u obliku drške kišobrana, u čijem se zavoju nalazi nakupljanje bakterija kvržica. Kvržične bakterije kao da su uvučene (progutane) korijenskom dlakom (slično pinocitozi).

Hipoteza invaginacije se u suštini ne može odvojiti od auksinske ili enzimske hipoteze, budući da se invaginacija javlja kao rezultat izlaganja auksinu ili enzimskom faktoru.

Proces unošenja bakterija kvržica u tkivo korijena je isti kod svih vrsta mahunarki i sastoji se od dvije faze. U prvoj fazi dolazi do infekcije korijenskih dlačica. U drugoj fazi, proces formiranja nodula se intenzivno odvija. Trajanje faza je različito kod različitih biljnih vrsta: kod Trifolium fragiferum prva faza traje 6 dana, kod Trifolium nigrescens - 3 dana.

U nekim slučajevima vrlo je teško otkriti granice između faza. Najintenzivnije unošenje bakterija kvržica u korijenske dlačice događa se u ranim fazama razvoja biljke. Druga faza se završava tokom masovnog formiranja nodula. Često se prodiranje bakterija kvržica u korijenske dlačice nastavlja čak i nakon što se čvorići formiraju na korijenu. Ova takozvana suvišna ili dodatna infekcija nastaje jer infekcija dlačica ne prestaje dugo vremena. U kasnijim fazama infekcije, čvorići se obično postavljaju niže duž korijena.

Vrsta razvoja, struktura i gustoća korijenskih dlačica ne utječu na brzinu unošenja kvržičnih bakterija. Mjesta formiranja nodula nisu uvijek povezana s lokacijama inficiranih dlačica.

Nakon prodora u korijen (kroz korijensku dlaku, epidermalnu ćeliju, mjesta oštećenja korijena), bakterije kvržica se potom kreću u tkiva korijena biljke. Najlakše bakterije prolaze kroz međućelijske prostore.

Jedna ćelija ili grupa bakterijskih ćelija mogu prodrijeti u tkivo korijena. Ako je uvedena posebna ćelija, ona može nastaviti da se kreće kroz tkivo kao jedna ćelija. Način infekcije korijena pojedinačnim ćelijama karakterističan je za biljke lupine.

Međutim, u većini slučajeva, invazijska stanica, aktivno se razmnožavajući, formira takozvane infekcijske niti (ili infekcijske vrpce) i već u obliku takvih niti se kreće u biljno tkivo.

Termin "infekciona nit" nastao je na osnovu proučavanja procesa infekcije u svjetlosnom mikroskopu. Počevši od Beijerinckovog rada, na nit infekcije se počelo gledati kao na sluzavu masu nalik hifama koja sadrži bakterije koje se razmnožavaju.

U suštini, nit infekcije je kolonija umnoženih bakterija. Njegov početak je mjesto gdje je jedna ćelija ili grupa ćelija prodrla. Moguće je da se kolonija bakterija (i, posljedično, buduća infekcijska nit) počne formirati na površini korijena prije unošenja bakterija u korijen.

Broj zaraženih korijenskih dlačica značajno varira među pojedinačnim biljkama. Obično se infektivne niti pojavljuju u deformisanim, uvrnutim korijenskim dlačicama. Međutim, postoje naznake da se slične niti ponekad nalaze u ravnim dlačicama. Češće se u korijenskim dlačicama uočava jedna granasta nit, rjeđe dvije. U nekim slučajevima postoji nekoliko niti u jednoj korijenskoj dlaki, ili u nekoliko zajedničkih niti infekcije, koje stvaraju jedan čvor (Sl. 151).

Procenat inficiranih korijenskih dlačica u ukupnom broju deformiranih dlačica je neobjašnjivo nizak. Obično se kreće od 0,6 do 3,2, povremeno dostižući 8,0. Udio uspješnih infekcija je još manji, jer među infektivnim nitima ima mnogo (do 80%) takozvanih abortivnih niti koje su prestale da se razvijaju. Brzina napredovanja normalno razvijajućih infektivnih niti u biljci je 5-8 mikrona na sat. Ovom brzinom, put kroz korijensku dlaku dužine 100-200 mikrona može proći kroz nit infekcije u roku od jednog dana.

Morfološke i anatomske karakteristike nodula u njihovoj ontogenezi.

Prema načinu formiranja, nodule mahunarki dijele se na dvije vrste:

Tip 1 - noduli nastaju prilikom diobe ćelija pericikla (korijenski sloj), obično se nalaze uz protoksilem (prvi u vremenu za formiranje krvnih žila) - endogeni tip formiranja nodula;

Tip 2 - noduli nastaju iz korteksa korijena kao rezultat unošenja patogena u parenhimske ćelije korteksa i endoderma (unutrašnji sloj primarnog korteksa) - egzogeni tip formiranja nodula.

U prirodi prevladava potonji tip. Tkiva centralnog cilindra korijena sudjeluju samo u formiranju vaskularnog sistema nodula i endogenog i egzogenog tipa.

Unatoč različitim pogledima na prirodu nastanka nodula egzo- i endotipova, proces njihovog razvoja je u osnovi isti. Međutim, ni jedan ni drugi tip formiranja nodula ni u kom slučaju ne treba poistovjećivati ​​s procesom formiranja bočnih korijena, unatoč činjenici da postoje neke sličnosti u njihovom nastanku. Dakle, formiranje nodula i bočnih korijena događa se istovremeno i, osim toga, u istoj zoni korijena.

Istovremeno, brojne karakteristike u razvoju bočnih korijena i nodula naglašavaju duboke razlike u vrsti njihovog formiranja. Bočni korijeni nastaju u periciklusu. Od prvih trenutaka razvoja povezani su sa središnjim cilindrom glavnog korijena, od kojeg se granaju središnji cilindri bočnih korijena, i uvijek nastaju naspram zraka primarnog drveta. Formiranje nodula, za razliku od bočnog korijena, moguće je bilo gdje. Na samom početku formiranja kvržičnog tkiva nema vaskularne veze sa centralnim cilindrom korijena, ona nastaje kasnije. Plovila se obično formiraju duž periferije nodula. Oni su preko traheidne zone povezani sa sudovima korena i imaju sopstvenu endodermu (Sl. 152).

Razlika u prirodi nodulacije i bočnih korijena posebno je jasno uočena kod seradele, budući da se kortikalno tkivo glavnog korijena ove biljke - mjesto prvih nodula - sastoji od relativno malog sloja ćelija i noduli postaju vidljivi vrlo brzo. nakon infekcije korijena bakterijama. Prvo formiraju spljoštene izbočine na korijenu, što ih omogućava razlikovati od konusnih izbočina bočnih korijena. Nodule se razlikuju od bočnih korijena po nizu anatomskih karakteristika: odsustvu središnjeg cilindra, korijenskih kapica i epiderme, te prisutnosti značajnog sloja kore koji prekriva kvržicu.

Formiranje kvržica (sl. 153, 1, 2) mahunarki događa se u periodu kada korijen još ima primarnu strukturu. Počinje podjelom kortikalnih stanica koje se nalaze na udaljenosti od 2-3 sloja od krajeva infektivnih niti. Slojevi korteksa, probijeni infektivnim nitima, ostaju nepromijenjeni. Istovremeno, kod seradele se dioba kortikalnih stanica događa direktno ispod zaražene korijenske dlake, dok se kod graška podjela stanica bilježi samo u pretposljednjem sloju korteksa.

Podjela sa formiranjem radijalne strukture tkiva nastavlja se na unutrašnje jezgro ćelija. Javlja se bez određenog smjera, nasumično, i kao rezultat toga nastaje meristem (sistem obrazovnih tkiva) nodula koji se sastoji od malih zrnastih ćelija.

Podijeljene ćelije korteksa se mijenjaju: jezgra su zaobljena i povećavaju se u veličini, posebno nukleoli. Nakon mitoze, jezgra se raspršuju i, bez da poprime svoj izvorni oblik, počinju se ponovo dijeliti.

Pojavljuje se sekundarni meristem. Ubrzo se u endodermu i periciklu javljaju znaci početne diobe, koja se u bivšim vanjskim stanicama javlja uglavnom tangencijalnim septama. Ova podjela se konačno proteže na zajednički meristematski kompleks, čije su male ćelije izdužene, vakuole nestaju, a jezgro ispunjava veći dio ćelije. Formira se takozvani primarni čvor, u plazmi ćelija u čijoj plazmi nema nodusnih bakterija, budući da su u ovoj fazi još uvijek unutar niti infekcije. Dok se formira primarni čvor, niti infekcije se granaju mnogo puta i mogu proći ili između ćelija - intercelularno (slika 154), ili kroz ćelije - intracelularno - i uneti bakterije (slika 155).

,

Međustanične infektivne niti, zbog aktivne reprodukcije kvržičnih bakterija u njima, često poprimaju bizaran oblik - formiraju se u obliku džepova (divertikula) ili baklji (vidi sliku 154).

Proces kretanja infekcijskih niti od ćelije do ćelije nije sasvim jasan. Očigledno, zarazne niti, kako smatra kanadski mikrobiolog D. Jordan (1963.), lutaju u obliku golih sluzavih niti u međućelijskim prostorima biljnog tkiva sve dok iz nekih još neobjašnjivih razloga ne počnu invaginirati u citoplazmu susjednih stanica. .

U nekim slučajevima, invaginacija niti infekcije javlja se u jednoj, u nekim slučajevima - u svakoj susjednoj ćeliji. Kroz ove invaginirane tubularne šupljine (divertikule), sadržaj niti zatvoren u sluzi. Najaktivniji rast infektivnih niti obično se javlja u blizini jezgra biljne ćelije. Probijanje niti je praćeno pomicanjem jezgra, koje se kreće prema mjestu infekcije, povećava se, mijenja oblik i degenerira. Slična slika se opaža i kod gljivične infekcije, kada je jezgra često

Paleontološki dokazi sugeriraju da su najstarije mahunarke koje su imale kvržice bile neke biljke koje pripadaju grupi Eucaesalpinioideae.

U modernim vrstama mahunarki na korijenima mnogih članova porodice Papilionaceae pronađene su nodule.

Filogenetski primitivniji predstavnici porodica kao što su Caesalpiniaceae, Mimosaceae, u većini slučajeva ne formiraju kvržice.

Od 13.000 vrsta (550 rodova) mahunarki, prisustvo nodula je do sada utvrđeno samo kod otprilike 1300 vrsta (243 roda). Ovo prvenstveno uključuje biljne vrste koje se koriste u poljoprivredi (više od 200).

Nakon formiranja kvržica, mahunarke stiču sposobnost apsorpcije atmosferskog dušika. Međutim, oni se mogu hraniti vezanim oblicima dušika - amonijevim solima i dušičnom kiselinom. Samo jedna biljka, Hedysarum coronarium, asimilira samo molekularni azot. Stoga, bez nodula u prirodi, ova biljka ne postoji.

Nodule bakterije opskrbljuju mahunarku dušikom koji se fiksira iz zraka. Biljke, zauzvrat, opskrbljuju bakterije proizvodima metabolizma ugljikohidrata i mineralnim solima koje su im potrebne za rast i razvoj.

Godine 1866., poznati botaničar i zemljoradnik M.S. Voronin vidio je najmanja "tijela" u čvorićima na korijenu mahunarki. Voronin je iznio hrabre pretpostavke za to vrijeme: povezao je stvaranje kvržica s djelovanjem bakterija, a pojačanu diobu stanica tkiva korijena s reakcijom biljke na bakterije koje su prodrle u korijen.

20 godina kasnije, holandski naučnik Beijerin izolovao je bakterije iz kvržica graška, grahorice, chiny, graha, seradele i lizalice i proučavao njihova svojstva, provjeravajući sposobnost da zaraze biljke i izazovu stvaranje kvržica. On je ove mikroorganizme nazvao Bacillus radicicola. Budući da bakterije koje formiraju spore pripadaju rodu Bacillus, a bakterije nodula nemaju tu sposobnost, A. Prazhmovsky ih je preimenovao u Bacterium radicicola. B. Frank je predložio uspješnije generičko ime za kvržične bakterije - Rhizobium (od grčkog rhizo - korijen, bio - život; život na korijenu). Ovaj naziv se ukorijenio i još uvijek se koristi u literaturi.

Za označavanje vrste bakterija kvržica, uobičajeno je da se generičkom nazivu Rhizobium doda pojam koji odgovara latinskom nazivu biljne vrste iz čijih su kvržica izolirane i na kojima mogu formirati kvržice. Na primjer, Rhizobium trifolii - bakterija kvržica djeteline, Rhizobium lupini - bakterija kvržica vučije itd. U slučajevima kada su kvržice sposobne da formiraju kvržice na korijenu različitih vrsta mahunarki, odnosno da izazovu tzv. unakrsnu infekciju, naziv vrste je kao da je kolektivan - odražava upravo tu sposobnost "unakrsne zaraze". Na primjer, Rhizobium leguminosarum - bakterija kvržica graška (Pisum), leće (Lens), činova (Lathyrus).

Morfologija i fiziologija nodulnih bakterija. Nodule bakterije karakterizira nevjerojatna raznolikost oblika - polimorfizam. Mnogi istraživači su skrenuli pažnju na to kada su proučavali bakterije nodula u čistoj kulturi u laboratorijskim uslovima i tlu. Nodule bakterije mogu biti u obliku štapa i ovalne. Među ovim bakterijama postoje i filtrabilni oblici, L-oblici, kokoidno nepokretni i pokretni organizmi.

Mlade bakterije nodula u čistoj kulturi na hranljivim podlogama obično imaju oblik štapića (Sl. 143, 2, 3), veličina štapića je približno 0,5-0,9 X 1,2-3,0 mikrona, pokretne, množe se dijeljenjem. U štapićastim stanicama kvržičnih bakterija djeteline uočena je podjela ligacijom. Sa starenjem, ćelije u obliku štapa mogu krenuti u pupanje. Prema Gramu, ćelije se boje negativno, njihova ultrafina struktura je tipična za gram-negativne bakterije (Sl. 143, 4).

Starenjem bakterije kvržica gube pokretljivost i prelaze u stanje takozvanih opasana šipka. Ovo ime su dobili zbog izmjenjivanja gustih i labavih dijelova protoplazme u stanicama. Ispruganost ćelija se dobro detektuje kada se posmatra pod svetlosnim mikroskopom nakon tretmana ćelija anilinskim bojama. Gusti dijelovi protoplazme (pojas) su obojeni gore od prostora između njih. U luminiscentnom mikroskopu, trake su svijetlozelene, razmaci između njih ne svijetle i izgledaju tamno (Sl. 143, 1). Pojasevi se mogu nalaziti u sredini kaveza ili na krajevima. Zonacija ćelija je vidljiva i na dijagramima elektronske difrakcije, ako se preparat ne tretira kontrastnim agensima pre gledanja (Sl. 143, 3). Vjerojatno je s godinama bakterijska stanica ispunjena masnim inkluzijama koje ne percipiraju boju i, kao rezultat, uzrokuju prugaste ćelije. Faza "pojasanih štapića" prethodi fazi formiranja bakteroida - ćelija nepravilnog oblika: zadebljale, razgranate, sferične, kruškolike i tikvice (sl. 144). Termin "bakteroidi" je u literaturu uveo J. Brunhorst 1885. godine, primjenjujući ga na formacije neobičnog oblika, mnogo veće od štapićastih bakterijskih stanica, koje se nalaze u tkivima nodula.

,

Bakteroidi sadrže više granula volutina i karakterizira ih veći sadržaj glikogena i masti od ćelija u obliku štapa. Bakteroidi uzgojeni u umjetnim hranjivim podlogama i formirani u tkivima nodula fiziološki su istog tipa. Vjeruje se da su bakteroidi oblici bakterija s nepotpunim procesom diobe. Nepotpunom diobom stanica kvržičnih bakterija nastaju dihotomno granati oblici bakteroida. Broj bakteroida raste sa starenjem kulture; njihov izgled je olakšan iscrpljivanjem hranjivog medija, nakupljanjem metaboličkih proizvoda i unošenjem alkaloida u podlogu.

U starim (dvomjesečnim) kulturama nodulnih bakterija, pomoću elektronskog mikroskopa, moguće je identificirati jasno definirane sferne formacije u mnogim ćelijama (Sl. 145) - artrospore. Njihov broj u ćelijama varira od 1 do 5.

Kvržice različitih vrsta mahunarki rastu različitom brzinom na hranjivim podlogama. Brzorastuće bakterije uključuju rizobiju graška, djeteline, lucerne, krmnog pasulja, grahorice, sočiva, chiny, slatke djeteline, piskavice, graha, slanutka i ptičje noge; do spororastuće - kvržice vučije, soje, kikirikija, seradele, mungo, kravljeg graška, esparzeta, draka. Potpuno formirane kolonije brzorastućih kultura mogu se dobiti 3. - 4. dana inkubacije, kolonije spororastućih kultura - 7. - 8. dana.

Brzorastuće bakterije kvržica karakterizira peritrihijski raspored flagela, dok su spororastuće bakterije monotrihijalne (Tablica 42, 1-5).

Osim flagela, u stanicama kvržičnih bakterija formiraju se filamentozni i perlasti izrasli kada se uzgajaju na tekućim podlogama (tablice 42, 43). Njihova dužina doseže 8-10 mikrona. Obično se nalaze na površini ćelije peritrihijalno, sadrže od 4 do 10 ili više po ćeliji.

,

Kolonije brzorastućih korijenskih kvržica su boje pečenog mlijeka, često prozirne, sluzave, glatkih rubova, umjereno konveksne i na kraju rastu na površini agar podloge. Kolonije spororastućih bakterija su konveksnije, male, suhe, guste i u pravilu ne rastu na površini podloge. Sluz koju proizvode kvržice je složeno jedinjenje polisaharidnog tipa, koje uključuje heksoze, pentoze i uronske kiseline.

Nodule bakterije su mikroaerofili (razvijaju se s malim količinama kisika u okolišu), međutim, preferiraju aerobne uvjete.

Nodule bakterije koriste ugljikohidrate i organske kiseline kao izvor ugljika u hranljivim medijima, a razne mineralne i organske spojeve koji sadrže dušik kao izvor dušika. Kada se uzgajaju na podlozi s visokim sadržajem tvari koje sadrže dušik, bakterije kvržica mogu izgubiti sposobnost da prodru u biljku i formiraju kvržice. Stoga se bakterije kvržica obično uzgajaju na biljnim ekstraktima (bujon graha, graška) ili ekstraktima tla. Fosfor neophodan za razvoj mogu se dobiti bakterijama nodula iz mineralnih i organskih spojeva koji sadrže fosfor; mineralna jedinjenja mogu poslužiti kao izvor kalcijuma, kalijuma i drugih mineralnih elemenata.

Za suzbijanje strane saprofitne mikroflore pri izolaciji bakterija kvržica iz kvržica ili direktno iz tla, preporučuju se hranjive podloge s dodatkom kristalno ljubičice, tanina ili antibiotika.

Za razvoj većine kultura nodulnih bakterija potrebna je optimalna temperatura u rasponu od 24-26 °. Na 0° i 37°C rast prestaje. Obično se kulture nodulnih bakterija čuvaju u laboratorijskim uslovima na niskim temperaturama (2-4 °C).

Mnoge vrste bakterija kvržica sposobne su sintetizirati vitamine B, kao i tvari za rast kao što je heteroauxin (-indoloctena kiselina).

Sve bakterije kvržica su približno podjednako otporne na alkalnu reakciju podloge (pH = 8,0), ali nejednako osjetljive na kiselu.

Specifičnost, virulencija, kompetitivnost i aktivnost nodulnih bakterija.

koncept specifičnost nodusne bakterije - kolektivne. Karakterizira sposobnost bakterija da formiraju kvržice u biljkama. Ako govorimo o bakterijama kvržica općenito, onda je za njih stvaranje kvržica samo u skupini mahunarki već samo po sebi specifično - imaju selektivnost za mahunarke.

Međutim, ako uzmemo u obzir pojedine kulture kvržičnih bakterija, ispada da među njima ima i onih koje su sposobne zaraziti samo određenu, nekad veću, nekad manju, grupu mahunarki, te je u tom smislu specifičnost bakterija kvržica. je selektivna sposobnost u odnosu na biljku domaćina. Specifičnost bakterija kvržica može biti uska (bakterije kvržica djeteline inficiraju samo grupu djetelina - specifičnost vrste, a bakterije kvržica vučije čak se mogu okarakterizirati sortnom specifičnošću - inficiraju samo alkaloidne ili bezalkaloidne sorte lupine). Sa širokom specifičnošću, bakterije kvržica graška mogu inficirati biljke graška, brade i mahune, a bakterije kvržica graška i graška mogu inficirati biljke graška, odnosno sve ih karakterizira sposobnost „unakrsne zaraze“. Specifičnost nodulnih bakterija je u osnovi njihove klasifikacije.

Specifičnost nodulnih bakterija nastala je kao rezultat njihove dugotrajne adaptacije na jednu biljku ili grupu njih i genetskog prijenosa ovog svojstva. S tim u vezi, postoji i različita prilagodljivost bakterija kvržica na biljke unutar grupe unakrsne infekcije. Dakle, bakterije kvržica lucerne mogu formirati kvržice u slatkoj djetelini. Ipak, one su prilagođenije lucerni, a bakterije slatke djeteline su prilagođenije slatkoj djetelini.

U procesu zaraze korijenskog sistema mahunarki bakterijama kvržica, to je od velikog značaja virulencija mikroorganizmi. Ako specifičnost određuje spektar djelovanja bakterija, tada virulentnost nodulnih bakterija karakterizira aktivnost njihovog djelovanja unutar ovog spektra. Virulencija se odnosi na sposobnost bakterija kvržica da prodru u tkivo korijena, umnože se tamo i izazovu stvaranje kvržica.

Važnu ulogu igra ne samo sama sposobnost prodiranja u korijenje biljke, već i brzina tog prodiranja.

Da bi se utvrdila virulencija soja kvržičnih bakterija, potrebno je utvrditi njegovu sposobnost da izazove nastanak nodula. Kriterij virulencije bilo kojeg soja može biti minimalni broj bakterija koji osigurava snažniju infekciju korijena u odnosu na druge sojeve, što kulminira stvaranjem kvržica.

U tlu, u prisustvu drugih sojeva, virulentniji soj neće uvijek prvi zaraziti biljku. U ovom slučaju treba uzeti u obzir takmičarska sposobnost, koji često maskira svojstvo virulencije u prirodnim uslovima.

Neophodno je da virulentni sojevi imaju i kompetitivnost, odnosno da mogu uspješno konkurirati ne samo predstavnicima lokalne saprofitne mikroflore, već i drugim sojevima nodulnih bakterija. Pokazatelj konkurentnosti soja je broj nodula koje on formira kao postotak od ukupnog broja kvržica na korijenu biljke.

Važno svojstvo kvržičnih bakterija je njihovo aktivnost(efikasnost), odnosno sposobnost asimilacije molekularnog dušika u simbiozi sa mahunarkama i zadovoljavanja potreba biljke domaćina u njoj. Ovisno o tome u kojoj mjeri bakterije kvržica doprinose povećanju prinosa mahunarki (Sl. 146), one se obično dijele na aktivne (djelotvorne), neaktivne (nedjelotvorne) i neaktivne (nedjelotvorne).

Soj bakterija neaktivan za jednu biljku domaćina u simbiozi sa drugom vrstom mahunarki može biti prilično efikasan. Stoga, kada se karakteriše soj u smislu njegove efikasnosti, uvek treba naznačiti u odnosu na koju biljnu vrstu domaćina se manifestuje njegovo dejstvo.

Aktivnost nodulnih bakterija nije njihovo trajno svojstvo. Često u laboratorijskoj praksi dolazi do gubitka aktivnosti u kulturama nodulnih bakterija. U tom slučaju se ili gubi aktivnost cijele kulture, ili se pojavljuju pojedinačne ćelije sa niskom aktivnošću. Do smanjenja aktivnosti nodulnih bakterija dolazi u prisustvu određenih antibiotika, aminokiselina. Jedan od razloga za gubitak aktivnosti nodulnih bakterija može biti utjecaj faga. Pasiranjem, odnosno višekratnim prolaskom bakterija kroz biljku domaćina (prilagođavanje određenoj biljnoj vrsti), moguće je dobiti efikasne sojeve od neefikasnih.

Izlaganje y-zracima omogućava dobijanje sojeva sa povećanom efikasnošću. Poznati su slučajevi nastanka visoko aktivnih radiomutanta bakterija nodula lucerke iz neaktivnog soja. Upotreba jonizujućeg zračenja, koje direktno utiče na promjenu genetskih karakteristika ćelije, po svoj prilici, može biti obećavajuća tehnika u selekciji visoko aktivnih sojeva kvržičnih bakterija.

Infekcija biljke mahunarki bakterijama kvržica.

Da bi se osigurao normalan proces infekcije korijenskog sustava bakterijama kvržica, potrebno je imati prilično veliki broj živih bakterijskih ćelija u zoni korijena. Mišljenja istraživača o broju ćelija potrebnih da bi se osigurao proces inokulacije su različita. Tako je, prema američkom naučniku O. Allenu (1966), potrebno 500-1000 ćelija za inokulaciju biljaka sa malim sjemenom, a najmanje 70 000 ćelija po 1 sjemenu za inokulaciju biljaka s velikim sjemenom. Prema australskom istraživaču J. Vincentu (1966.), u trenutku inokulacije, svako sjeme treba sadržavati najmanje nekoliko stotina živih i aktivnih ćelija bakterija nodula. Postoje dokazi da pojedinačne ćelije mogu prodrijeti i u tkivo korijena.

Tokom razvoja korijenskog sistema mahunarke, umnožavanje kvržičnih bakterija na površini korijena stimulira se izlučivanjem korijena. Produkti razaranja korijenskih klobuka i dlačica također igraju važnu ulogu u obezbjeđivanju pogodnog supstrata kvržičastim bakterijama.

U rizosferi mahunarki, razvoj bakterija kvržica je oštro stimuliran, a kod žitarica se ovaj fenomen ne opaža.

Na površini korijena nalazi se sloj sluzave tvari (matriks), koji se formira bez obzira na prisustvo bakterija u rizosferi. Ovaj sloj je jasno vidljiv kada se pregleda u svjetlosno-optičkom mikroskopu (sl. 147). Kvržičaste bakterije nakon inokulacije obično navale na ovaj sloj i nakupljaju se u njemu (Sl. 148) zbog stimulativnog djelovanja korijena, koje se manifestira čak i na udaljenosti do 30 mm.

,

U tom periodu, koji prethodi unošenju bakterija kvržica u tkivo korijena, bakterije u rizosferi su izuzetno pokretne. U ranim studijama, u kojima je za istraživanje korišten svjetlosni mikroskop, bakterije nodula koje se nalaze u zoni rizosfere dobile su naziv schwermers (gonidija ili zoospore) - "rojenje". Koristeći Faereusovu metodu (1957), moguće je uočiti formiranje izuzetno brzih kolonija švermera u predjelu vrha korijena i korijenskih dlačica. Kolonije švermera postoje vrlo kratko - manje od jednog dana.

O mehanizmu penetracije nodusne bakterije u korijenu biljke postoje brojne hipoteze. Najzanimljivije od njih su sljedeće. Autori jedne od hipoteza navode da bakterije kvržica prodiru u korijen oštećenjem epidermalnog i kortikalnog tkiva (posebno na mjestima gdje se bočni korijeni granaju). Ova hipoteza postavljena je na osnovu istraživanja Brila (1888), koji je izazvao stvaranje kvržica u mahunarkama probijanjem korijena iglom koja je prethodno bila uronjena u suspenziju bakterija kvržica. Kao poseban slučaj, takav put implementacije je sasvim stvaran. Na primjer, kod kikirikija kvržice se pretežno nalaze u pazuhu grana korijena, što sugerira prodiranje kvržičnih bakterija u korijen kroz praznine tokom klijanja bočnih korijena.

Zanimljiva i ne neutemeljena hipoteza je prodiranje bakterija kvržica u tkivo korijena kroz korijenske dlačice. Većina istraživača prepoznaje prolazak bakterija kvržica kroz korijenske dlačice.

Sugestija P. Darta i F. Mercera (1965) vrlo je uvjerljiva da bakterije nodula prodiru u korijen u obliku malih (0,1-0,4 µm) kokoidnih stanica kroz intervale (0,3-0,4 µm) celulozne fibrilarne mreže. primarni omotač korijenskih dlačica. Elektronsko mikroskopske fotografije (sl. 149) površine korijena, dobivene metodom replike, i činjenica skupljanja ćelija bakterija kvržica u rizosferi leguminoza potvrđuju ovu poziciju.

Moguće je da bakterije nodula mogu prodrijeti u korijen kroz epidermalne stanice mladih vrhova korijena. Prema Prazhmovskyju (1889), bakterije mogu prodrijeti u korijen samo kroz mladu ćelijsku stijenku (od korijenskih dlačica ili epidermalnih stanica) i potpuno su nesposobne da prevladaju kemijski izmijenjeni ili plutasti sloj korteksa. Ovo može objasniti da se kvržice obično razvijaju na mladim dijelovima glavnog korijena i bočnim korijenima koji se pojavljuju.

Nedavno je hipoteza o auksinu dobila veliku popularnost. Autori ove hipoteze smatraju da bakterije nodula prodiru u korijen zbog stimulacije sinteze β-indoloctene kiseline (heteroauksina) iz triptofana, koji je uvijek prisutan u izlučevinama korijena biljaka. Slika 150.

Izvor β-indolioctene kiseline u trenutku infekcije biljke, očigledno, nisu samo biljke koje luče triptofan kroz korijenski sistem, koji mnoge vrste bakterija, uključujući korijenske kvržice, mogu pretvoriti u β-indolioctenu kiselinu. U sintezi heteroauksina mogu učestvovati i same bakterije nodula, a moguće i druge vrste mikroorganizama u tlu koji žive u zoni korijena.

Međutim, hipoteza o auksinu ne može se bezuslovno prihvatiti. Djelovanje heteroauksina je nespecifično i uzrokuje zakrivljenost korijenskih dlačica kod raznih biljnih vrsta, a ne samo kod mahunarki. Istovremeno, bakterije kvržica uzrokuju zakrivljenost korijenskih dlačica samo kod mahunarki, pokazujući prilično značajnu selektivnost. Kada bi razmatrani efekat odredila samo β-indolioctena kiselina, onda ne bi bilo takve specifičnosti. Osim toga, priroda promjena u korijenskim dlačicama pod utjecajem nodulnih bakterija je nešto drugačija nego pod utjecajem heteroauksina.

Također treba napomenuti da su u nekim slučajevima nezakrivljene korijenske dlačice izložene infekciji. Zapažanja pokazuju da je kod lucerke i graška 60-70% korijenskih dlaka uvijeno i uvijeno, a kod djeteline - oko 50%. Kod nekih vrsta djeteline ova reakcija je zabilježena u najviše 1/4 zaraženih dlaka. U reakciji zakrivljenosti, očigledno, stanje korijenske dlake je od velike važnosti. Rastuće korijenske dlake najosjetljivije su na djelovanje tvari koje proizvode bakterije.

Poznato je da bakterije kvržica uzrokuju omekšavanje zidova korijenskih dlačica. Međutim, ne stvaraju ni celulazu ni pektinolitičke enzime. S tim u vezi, sugerirano je da bakterije kvržica prodiru u korijen zbog lučenja sluzi polisaharidne prirode, što uzrokuje sintezu enzima poligalakturonaze ​​u biljkama. Ovaj enzim, uništavajući pektinske tvari, utječe na ljusku korijenskih dlačica, čineći je plastičnijom i propusnijom. U malim količinama, poligalakturonaza je uvijek prisutna u korijenskim dlačicama i, očigledno, uzrokujući djelomično otapanje odgovarajućih komponenti membrane, omogućava ćeliji da se rasteže.

Neki istraživači vjeruju da bakterije kvržica prodiru u korijen zahvaljujući satelitskim bakterijama koje proizvode pektinolitičke enzime. Ova hipoteza je postavljena na osnovu sljedećih činjenica. Prilikom mikroskopije korijenskih dlačica, mnogi istraživači su primijetili prisutnost svjetlosne mrlje u blizini koje se nakupljaju bakterije nodula. Ova mrlja može biti znak početka maceracije (destrukcije) tkiva protopektinazom, slično istom znaku koji se opaža kod biljaka kod mnogih bakterijskih bolesti. Osim toga, utvrđeno je da avirulentne kulture bakterija kvržica u prisustvu bakterija koje proizvode pektinolitičke enzime postaju sposobne prodrijeti u korijen.

Treba napomenuti još jednu hipotezu, prema kojoj bakterije kvržica ulaze u korijen prilikom formiranja prstasto izbočine na površini korijenske dlake. Difrakcija elektrona presjeka korijenske dlake koja potvrđuje ovu hipotezu (sl. 150, 3) pokazuje korijensku dlaku savijenu u obliku drške kišobrana, u čijem se zavoju nalazi nakupljanje bakterija kvržica. Kvržične bakterije kao da su uvučene (progutane) korijenskom dlakom (slično pinocitozi).

Hipoteza invaginacije se u suštini ne može odvojiti od auksinske ili enzimske hipoteze, budući da se invaginacija javlja kao rezultat izlaganja auksinu ili enzimskom faktoru.

Proces unošenja bakterija kvržica u tkivo korijena je isti kod svih vrsta mahunarki i sastoji se od dvije faze. U prvoj fazi dolazi do infekcije korijenskih dlačica. U drugoj fazi, proces formiranja nodula se intenzivno odvija. Trajanje faza je različito kod različitih biljnih vrsta: kod Trifolium fragiferum prva faza traje 6 dana, kod Trifolium nigrescens - 3 dana.

U nekim slučajevima vrlo je teško otkriti granice između faza. Najintenzivnije unošenje bakterija kvržica u korijenske dlačice događa se u ranim fazama razvoja biljke. Druga faza se završava tokom masovnog formiranja nodula. Često se prodiranje bakterija kvržica u korijenske dlačice nastavlja čak i nakon što se čvorići formiraju na korijenu. Ova takozvana suvišna ili dodatna infekcija nastaje jer infekcija dlačica ne prestaje dugo vremena. U kasnijim fazama infekcije, čvorići se obično postavljaju niže duž korijena.

Vrsta razvoja, struktura i gustoća korijenskih dlačica ne utječu na brzinu unošenja kvržičnih bakterija. Mjesta formiranja nodula nisu uvijek povezana s lokacijama inficiranih dlačica.

Nakon prodora u korijen (kroz korijensku dlaku, epidermalnu ćeliju, mjesta oštećenja korijena), bakterije kvržica se potom kreću u tkiva korijena biljke. Najlakše bakterije prolaze kroz međućelijske prostore.

Jedna ćelija ili grupa bakterijskih ćelija mogu prodrijeti u tkivo korijena. Ako je uvedena posebna ćelija, ona može nastaviti da se kreće kroz tkivo kao jedna ćelija. Način infekcije korijena pojedinačnim ćelijama karakterističan je za biljke lupine.

Međutim, u većini slučajeva, invazijska stanica, aktivno se razmnožavajući, formira takozvane infekcijske niti (ili infekcijske vrpce) i već u obliku takvih niti se kreće u biljno tkivo.

Termin "infekciona nit" nastao je na osnovu proučavanja procesa infekcije u svjetlosnom mikroskopu. Počevši od Beijerinckovog rada, na nit infekcije se počelo gledati kao na sluzavu masu nalik hifama koja sadrži bakterije koje se razmnožavaju.

U suštini, nit infekcije je kolonija umnoženih bakterija. Njegov početak je mjesto gdje je jedna ćelija ili grupa ćelija prodrla. Moguće je da se kolonija bakterija (i, posljedično, buduća infekcijska nit) počne formirati na površini korijena prije unošenja bakterija u korijen.

Broj zaraženih korijenskih dlačica značajno varira među pojedinačnim biljkama. Obično se infektivne niti pojavljuju u deformisanim, uvrnutim korijenskim dlačicama. Međutim, postoje naznake da se slične niti ponekad nalaze u ravnim dlačicama. Češće se u korijenskim dlačicama uočava jedna granasta nit, rjeđe dvije. U nekim slučajevima postoji nekoliko niti u jednoj korijenskoj dlaki, ili u nekoliko zajedničkih niti infekcije, koje stvaraju jedan čvor (Sl. 151).

Procenat inficiranih korijenskih dlačica u ukupnom broju deformiranih dlačica je neobjašnjivo nizak. Obično se kreće od 0,6 do 3,2, povremeno dostižući 8,0. Udio uspješnih infekcija je još manji, jer među infektivnim nitima ima mnogo (do 80%) takozvanih abortivnih niti koje su prestale da se razvijaju. Brzina napredovanja normalno razvijajućih infektivnih niti u biljci je 5-8 mikrona na sat. Ovom brzinom, put kroz korijensku dlaku dužine 100-200 mikrona može proći kroz nit infekcije u roku od jednog dana.

Morfološke i anatomske karakteristike nodula u njihovoj ontogenezi.

Prema načinu formiranja, nodule mahunarki dijele se na dvije vrste:

Tip 1 - noduli nastaju prilikom diobe ćelija pericikla (korijenski sloj), obično se nalaze uz protoksilem (prvi u vremenu za formiranje krvnih žila) - endogeni tip formiranja nodula;

Tip 2 - noduli nastaju iz korteksa korijena kao rezultat unošenja patogena u parenhimske ćelije korteksa i endoderma (unutrašnji sloj primarnog korteksa) - egzogeni tip formiranja nodula.

U prirodi prevladava potonji tip. Tkiva centralnog cilindra korijena sudjeluju samo u formiranju vaskularnog sistema nodula i endogenog i egzogenog tipa.

Unatoč različitim pogledima na prirodu nastanka nodula egzo- i endotipova, proces njihovog razvoja je u osnovi isti. Međutim, ni jedan ni drugi tip formiranja nodula ni u kom slučaju ne treba poistovjećivati ​​s procesom formiranja bočnih korijena, unatoč činjenici da postoje neke sličnosti u njihovom nastanku. Dakle, formiranje nodula i bočnih korijena događa se istovremeno i, osim toga, u istoj zoni korijena.

Istovremeno, brojne karakteristike u razvoju bočnih korijena i nodula naglašavaju duboke razlike u vrsti njihovog formiranja. Bočni korijeni nastaju u periciklusu. Od prvih trenutaka razvoja povezani su sa središnjim cilindrom glavnog korijena, od kojeg se granaju središnji cilindri bočnih korijena, i uvijek nastaju naspram zraka primarnog drveta. Formiranje nodula, za razliku od bočnog korijena, moguće je bilo gdje. Na samom početku formiranja kvržičnog tkiva nema vaskularne veze sa centralnim cilindrom korijena, ona nastaje kasnije. Plovila se obično formiraju duž periferije nodula. Oni su preko traheidne zone povezani sa sudovima korena i imaju sopstvenu endodermu (Sl. 152).

Razlika u prirodi nodulacije i bočnih korijena posebno je jasno uočena kod seradele, budući da se kortikalno tkivo glavnog korijena ove biljke - mjesto prvih nodula - sastoji od relativno malog sloja ćelija i noduli postaju vidljivi vrlo brzo. nakon infekcije korijena bakterijama. Prvo formiraju spljoštene izbočine na korijenu, što ih omogućava razlikovati od konusnih izbočina bočnih korijena. Nodule se razlikuju od bočnih korijena po nizu anatomskih karakteristika: odsustvu središnjeg cilindra, korijenskih kapica i epiderme, te prisutnosti značajnog sloja kore koji prekriva kvržicu.

Formiranje kvržica (sl. 153, 1, 2) mahunarki događa se u periodu kada korijen još ima primarnu strukturu. Počinje podjelom kortikalnih stanica koje se nalaze na udaljenosti od 2-3 sloja od krajeva infektivnih niti. Slojevi korteksa, probijeni infektivnim nitima, ostaju nepromijenjeni. Istovremeno, kod seradele se dioba kortikalnih stanica događa direktno ispod zaražene korijenske dlake, dok se kod graška podjela stanica bilježi samo u pretposljednjem sloju korteksa.

Podjela sa formiranjem radijalne strukture tkiva nastavlja se na unutrašnje jezgro ćelija. Javlja se bez određenog smjera, nasumično, i kao rezultat toga nastaje meristem (sistem obrazovnih tkiva) nodula koji se sastoji od malih zrnastih ćelija.

Podijeljene ćelije korteksa se mijenjaju: jezgra su zaobljena i povećavaju se u veličini, posebno nukleoli. Nakon mitoze, jezgra se raspršuju i, bez da poprime svoj izvorni oblik, počinju se ponovo dijeliti.

Pojavljuje se sekundarni meristem. Ubrzo se u endodermu i periciklu javljaju znaci početne diobe, koja se u bivšim vanjskim stanicama javlja uglavnom tangencijalnim septama. Ova podjela se konačno proteže na zajednički meristematski kompleks, čije su male ćelije izdužene, vakuole nestaju, a jezgro ispunjava veći dio ćelije. Formira se takozvani primarni čvor, u plazmi ćelija u čijoj plazmi nema nodusnih bakterija, budući da su u ovoj fazi još uvijek unutar niti infekcije. Dok se formira primarni čvor, niti infekcije se granaju mnogo puta i mogu proći ili između ćelija - intercelularno (slika 154), ili kroz ćelije - intracelularno - i uneti bakterije (slika 155).

,

Međustanične infektivne niti, zbog aktivne reprodukcije kvržičnih bakterija u njima, često poprimaju bizaran oblik - formiraju se u obliku džepova (divertikula) ili baklji (vidi sliku 154).

Proces kretanja infekcijskih niti od ćelije do ćelije nije sasvim jasan. Očigledno, zarazne niti, kako smatra kanadski mikrobiolog D. Jordan (1963.), lutaju u obliku golih sluzavih niti u međućelijskim prostorima biljnog tkiva sve dok iz nekih još neobjašnjivih razloga ne počnu invaginirati u citoplazmu susjednih stanica. .

U nekim slučajevima, invaginacija niti infekcije javlja se u jednoj, u nekim slučajevima - u svakoj susjednoj ćeliji. Kroz ove invaginirane tubularne šupljine (divertikule), sadržaj niti zatvoren u sluzi. Najaktivniji rast infektivnih niti obično se javlja u blizini jezgra biljne ćelije. Probijanje niti je praćeno pomicanjem jezgra, koje se kreće prema mjestu infekcije, povećava se, mijenja oblik i degenerira. Slična slika se uočava i kod gljivične infekcije, kada jezgro često juri ka hifama koje napadaju, privlače se oštećenjem kao na mjestu najveće fiziološke aktivnosti, približavaju se niti, nabubre i kolabiraju. Očigledno, ovo je karakteristično za odgovor biljke na infekciju.

U jednogodišnjim biljkama zarazne niti se obično pojavljuju u prvom periodu infekcije korijena, u višegodišnjim biljkama - tokom dugog perioda razvoja.

Bakterije se mogu osloboditi iz niti infekcije u različito vrijeme i na različite načine. Izlazak bakterija je u pravilu vrlo dug proces, posebno kod višegodišnjih biljaka. Obično je oslobađanje bakterija iz zarazne niti u citoplazmu biljke domaćina povezano s unutarnjim pritiskom koji je rezultat intenzivnog razmnožavanja bakterija u niti i njihovog izlučivanja sluzi. Ponekad bakterije iskliznu iz niti u grupama okružene sluzi infektivnog konca, u obliku vezikula (mjehurastih formacija) (Sl. 157). Budući da vezikule nemaju membrane, izlazak bakterija iz njih je vrlo jednostavan. Nodule bakterije također mogu ući u biljne stanice pojedinačno iz međućelijskog prostora (Sl. 156).

,

Nodule bakterije koje su izašle iz niti infekcije nastavljaju da se razmnožavaju u tkivu domaćina. Njihovo razmnožavanje tokom ovog perioda odvija se konstrikcionom deobom (Sl. 158). Većina bakterija se razmnožava u citoplazmi ćelije, a ne u infekcijskoj niti. Inficirane ćelije stvaraju buduće bakteroidno tkivo.

Ispunjene brzomnožećim stanicama bakterija kvržica, biljne stanice počinju se intenzivno dijeliti. U trenutku mitotičke diobe inficiranih stanica, kvržične bakterije se mogu akumulirati na dva suprotna pola matične stanice i pasivno ući u ćelije kćeri. U ovom slučaju, svaka od nenabijenih stanica je pod snažnim stimulativnim djelovanjem nodulnih bakterija i kao rezultat toga se također dijeli. Zahvaljujući ovoj snažnoj mitotičkoj diobi meristematskih ćelija, bakterije nodula se šire u tkiva nodula i povećava se volumen bakteroidne regije.

Zaraženo tkivo, koje se sastoji od gusto ležećih ćelija koje se aktivno dijele, prvo ima oblik skraćenog konusa. Nakon toga, zbog postepenog rasta ovog konusa i istovremene podjele i razvoja meristematskih stanica, tkivo čvorića raste i gubi oblik konusa.

Dakle, čvor se povećava prvo kao rezultat radijalne i tangencijalne diobe jezgre ćelija, a zatim zbog povećanja njihove veličine i istovremene diobe. Nakon što se biljne stanice potpuno napune bakterijama, mitoza se zaustavlja. Međutim, ćelije nastavljaju da se povećavaju u veličini i često su jako izdužene. Njihova veličina je nekoliko puta veća od veličine neinficiranih biljnih stanica, koje se nalaze između njih u bakteroidnoj zoni nodula.

Veza mladog nodula s korijenom mahunarke ostvaruje se zahvaljujući vaskularnim vlaknastim snopovima. MS Voronin (1866.) prvi put je uočio vaskularne fibrozne snopove. Vrijeme nastanka vaskularnog sistema u kvržicama različitih vrsta mahunarki je različito. Dakle, kod kvržica soje početak razvoja vaskularnih snopova poklapa se s trenutkom prodora kvržičnih bakterija u dva sloja parenhima krave. Sa rastom nodula, provodni sistem raste, grana se i okružuje bakteroidnu regiju.

Paralelno sa procesom diferencijacije vaskularnog sistema, iz vanjskog sloja primarnog nodula formira se endoderm čvora. Tada je kvržica zaobljena, njen periferni ćelijski sloj je okružen korom nodula.

Epiderma korijena puca, a čvorić nastavlja da se razvija i povećava veličinu.

Koristeći svjetlosni mikroskop na uzdužnim presjecima zrelih nodula, obično se jasno razlikuju 4 karakteristične zone diferencijacije tkiva: korteks, meristem, bakteroidna zona i vaskularni sistem. Sva tkiva čvorova diferenciraju se u akropetalnom nizu jer meristem pokreće nove ćelije.

kora kvržica- ljuska nodula, koja obavlja zaštitnu funkciju. Kora se sastoji od nekoliko redova neinficiranih parenhimskih ćelija, čija su veličina i karakteristike različite kod različitih mahunarki. Najčešće ćelije korteksa imaju izdužen oblik i veće su u usporedbi s drugim stanicama nodula.

U kori kvržica višegodišnjih drvenastih vrsta često se nalaze ćelije sa plutastim membranama koje sadrže smole, tanin i tanine.

Meristem nodula nalazi se ispod ćelija korteksa i zona je intenzivnog dijeljenja i neinficiranih ćelija. Meristem nodula karakteriziraju gusto raspoređene, bez međućelijskih prostora, male stanice tankih stijenki nepravilnog oblika. Meristemske ćelije kvržica slične su ćelijama drugih vrsta meristematskog tkiva (vrh korena, vrh stabljike). Meristemske ćelije čvorova sadrže gustu, fino granularnu citoplazmu s ribozomima, Golgijevim tijelima, protoplastidima, mitohondrijama i drugim strukturama. Postoje male vakuole. U središtu citoplazme nalazi se veliko jezgro s nuklearnom membranom, porama i jasno definiranim nukleolom. Funkcije meristematskih ćelija su formiranje ćelija korteksa nodula, bakteroidne regije i vaskularnog sistema. U zavisnosti od lokacije meristema, kvržice imaju različite oblike: sferične (grašak, pasulj, seradela, kikiriki) ili cilindrične (lucerna, grahorica, čin, bagrem, djetelina) (Sl. 159). Meristem, koji se nalazi u odvojenim područjima duž periferije kvržice, dovodi do stvaranja kvržica u obliku mufa u lupini.

Meristem kvržica funkcionira dugo, čak i za vrijeme nekroze nodula, kada su već ispunjeni liziranom bakteroidnom masom i uništenim biljnim stanicama.

Bakteroidna zona kvržica zauzima središnji dio i čini od 16 do 50% ukupne suhe mase nodula. U prvom periodu formiranja kvržica, to je u suštini bakterijska zona (Sl. 160), budući da je ispunjena bakterijskim ćelijama koje su u bakterijskoj, a ne u bakteroidnoj fazi razvoja. Ipak, kada je u pitanju zona tkiva kvržica koja sadrži bakterije, uobičajeno je da se zove bakteroid.

Bakteroidna regija nodula sastoji se uglavnom od ćelija inficiranih bakterijama kvržica i dijelom od neinficiranih ćelija koje se nalaze uz njih, ispunjenih pigmentima, taninima, a do jeseni - škrobom.

U nodusima nastalim od efektivnih sojeva kvržičnih bakterija, prosječni relativni volumen bakteroidne zone je veći nego kod nodula nastalih uvođenjem neefikasnih sojeva.

U nekim slučajevima, volumen bakteroidne regije dostiže maksimum u ranom periodu života nodula i nakon toga ostaje relativno konstantan. Bakteroidna zona je probijena gustom mrežom infektivnih niti, a okružena je vaskularnim fibroznim snopovima duž periferije.

Oblik bakteroida u kvržicama različitih vrsta mahunarki može biti različit (tabela 44). Dakle, u wikiju, rang i grašak, oni su dvogranati ili račvasti. Za djetelinu i esparzetu preovlađujući oblik bakteroida je sferni, kruškoliki, nabrekli, jajoliki, a za slanutak okrugli. Oblik bacteroides graha, seradele, ptičje noge i lupine je gotovo štapićast.

Bakteroidi ispunjavaju većinu biljne ćelije, sa izuzetkom centralne zone jezgra i vakuola. Dakle, postotak bakteroida u bakteroidnoj zoni kvržice ružičaste boje iznosi 94,2 od ukupnog broja nodulnih bakterija. Bakteroidne ćelije su 3-5 puta veće od bakterijskih ćelija (sl. 161, 1, 2).

Bakteroidi nodulnih bakterija su od posebnog interesa zbog činjenice da su gotovo jedini stanovnici kvržica mahunarki u periodu intenzivnog vezivanja atmosferskog dušika na njih. Neki istraživači smatraju bakteroide patološkim degenerativnim oblicima i ne povezuju proces fiksacije dušika s bakteroidnim oblikom kvržičnih bakterija. Većina istraživača smatra da su bakteroidi najizdržljiviji i najaktivniji oblici kvržičnih bakterija i da mahunarke fiksiraju atmosferski dušik samo uz njihovo učešće (Sl. 162).

Vaskularni sistem nodul pruža vezu između bakterije i biljke domaćina. Hranjive tvari i metabolički proizvodi se transportuju kroz vaskularne snopove. Vaskularni sistem se rano razvija i dugo funkcioniše.

Potpuno formirane žile imaju specifičnu strukturu: sastoje se od ksilemskih traheida, floemskih vlakana, sitastih cijevi i pratećih stanica.

Ovisno o vrsti mahunarki, veza nodula se vrši kroz jedan ili više vaskularnih snopova. Na primjer, kod graška postoje dva diferencirana vaskularna čvora u bazi nodula. Svaki od njih se obično dva puta dihotomno grana, a kao rezultat toga, 8 snopova prolazi kroz nodul od mjesta drugog dihotomnog grananja. Mnoge biljke imaju samo jedan grozd, dok su u isto vreme, u jednoj kvržici Sesbania grandiflora u dobi od godinu dana, uspele da ih nabroje i do 126. Neretko se vaskularni sistem kvržice odvaja spolja od kore. slojem djelomično ili potpuno suberiziranih stanica, nazvanih endoderma nodula, pričvršćenih za endodermu korijena. Endoderm čvorića je vanjski sloj neinficiranog goveđeg parenhima, smješten između tkiva čvorića i korteksa korijena.

Kod većine biljnih vrsta kvržice se formiraju prema opisanom tipu. Stoga je formiranje nodula rezultat složenih pojava koje počinju izvan korijena. Nakon početnih faza infekcije dolazi do stvaranja čvorića, zatim do širenja bakterija u zoni tkiva čvorića i fiksacije dušika.

Sve faze razvoja kvržičnih bakterija, prema češkom mikrobiologu V. Kasu (1928), mogu se pratiti na dijelovima nodula. Dakle, u gornjem dijelu nodula, na primjer, lucerna sadrži uglavnom male stanice u obliku štapića koji se dijele, malu količinu mladih bakteroida, čiji se broj postepeno povećava kako se kvržica razvija. U srednjem, ružičastom dijelu čvorića nalaze se pretežno bakteroidne ćelije i rjeđe male štapićaste ćelije. U podnožju kvržice u ranim fazama vegetacije biljke domaćina, bakteroidi su isti kao i u njegovom srednjem dijelu, ali su do kraja vegetacije više nabubreni i ranije degeneriraju.

Vrijeme pojave prvih vidljivih kvržica na korijenu različitih vrsta mahunarki je različito (MV Fedorov, 1952). Njihova pojava kod većine mahunarki najčešće se javlja tokom razvoja prvih pravih listova. Tako se formiranje prvih nodula lucerke uočava između 4. i 5. dana nakon nicanja, a 7.-8. dana se ovaj proces javlja u svim biljkama. Čvorići srpaste lucerke pojavljuju se nakon 10 dana.

U periodu funkcionisanja čvorovi su obično gusti. Noduli formirani aktivnim kulturama bakterija su bjelkaste boje u mladoj dobi. Do trenutka ispoljavanja optimalne aktivnosti, postaju ružičasti. Čvorići koji su nastali tokom infekcije neaktivnim bakterijskim kulturama su zelenkaste boje. Često se njihova struktura praktički ne razlikuje od strukture nodula nastalih uz sudjelovanje aktivnih sojeva bakterija nodula, ali se prerano uništavaju.

U nekim slučajevima, struktura čvorova formiranih od neaktivnih bakterija odstupa od norme. To se izražava u dezorganizaciji tkiva čvorića, koje obično gubi svoju jasno izraženu zonsku diferencijaciju.

Ružičastu boju određuje prisustvo pigmenta u čvorićima, koji je po hemijskom sastavu sličan hemoglobinu u krvi. U vezi s tim, pigment se naziva leghemoglobin (legoglobin) - Leguminosae hemoglobin. Legoglobin se nalazi samo u onim ćelijama nodula koje sadrže bakteroide. Lokaliziran je u prostoru između bakteroida i membrane koja ih okružuje.

Njegova količina se kreće od 1 do 3 mg po 1 g kvržice, ovisno o vrsti mahunarke.

Kod jednogodišnjih mahunarki, do kraja vegetacije, kada se završi proces fiksacije dušika, crveni pigment prelazi u zeleni. Promjena boje počinje na dnu nodula, kasnije njegov vrh postaje zelen. Kod višegodišnjih mahunarki ozelenjavanje kvržica se ne javlja ili se opaža samo u podnožju kvržice. U različitim vrstama mahunarki, prijelaz crvenog pigmenta u zeleni odvija se s različitim stupnjevima intenziteta i različitom brzinom.

Kvržice jednogodišnjih biljaka funkcioniraju relativno kratko. Kod većine mahunarki nekroza kvržica počinje tokom perioda cvatnje biljke domaćina i obično se nastavlja od centra ka periferiji kvržice. Jedan od prvih znakova uništenja je formiranje sloja ćelija sa snažnim zidovima u podnožju nodula. Ovaj sloj ćelija, koji se nalazi okomito na glavnu žilu korena, odvaja ga od čvorića i odlaže razmenu hranljivih materija između biljke domaćina i tkiva kvržica.

U ćelijama degenerirajućeg tkiva nodula pojavljuju se brojne vakuole, jezgra gube sposobnost bojenja, neke od stanica bakterija nodula liziraju, a neke migriraju u okolinu u obliku malih ćelija kokoidnih artrospora.

Proces formiranja artrospora u tkivu lizirajućeg nodula prikazan je na slikama 163-165. Prestaju da funkcionišu tokom ovog perioda i infektivne niti (Sl. 166). Ćelije domaćini gube turgor i komprimiraju ih susjedne stanice za koje je to još karakteristično.

,
, ,

Stari čvorići su tamni, mlohavi, mekani. Prilikom rezanja iz njih viri vodenasta sluz. Proces uništavanja nodula, počevši od zatvaranja ćelija vaskularnog sistema, olakšan je smanjenjem fotosintetske aktivnosti biljke, suhoćom ili prekomjernom vlažnošću okoliša.

U uništenom, sluzavom čvoru često se nalaze protozoe, gljivice, bacili i mali štapićasti čvorići.

Stanje biljke domaćina utiče na trajanje funkcionisanja nodula. Dakle, prema F. F. Yukhimchuku (1957), kastriranjem ili uklanjanjem cvjetova vučike moguće je produžiti period njene vegetacije, a ujedno i vrijeme aktivne aktivnosti kvržičnih bakterija.

Kvržice višegodišnjih biljaka, za razliku od jednogodišnjih, mogu funkcionirati dugi niz godina. Tako, na primjer, karagana ima višegodišnje kvržice, u kojima se proces starenja ćelija odvija istovremeno sa stvaranjem novih. Kod glicinije (kineske glicinije) funkcionišu i višegodišnje kvržice koje formiraju sferične otekline na korijenu domaćina. Do kraja vegetacijske sezone, bakteroidno tkivo višegodišnjih kvržica degradira, ali cijeli nodul ne umire. Sljedeće godine ponovo počinje s radom.

Faktori koji određuju simbiotski odnos bakterija kvržica sa mahunarkama. Za simbiozu, koja osigurava dobar razvoj biljaka, neophodan je određeni set uslova sredine. Ako su uslovi okoline nepovoljni, onda će, čak i uprkos visokoj virulenciji, konkurentskoj sposobnosti i aktivnosti mikrosimbionta, efikasnost simbioze biti niska.

Za razvoj kvržica optimalan sadržaj vlage je 60-70% ukupnog vlažnog kapaciteta tla. Minimalna vlažnost tla pri kojoj je još moguć razvoj kvržičnih bakterija u tlu je približno jednaka 16% ukupnog kapaciteta vlage. Kada je vlažnost ispod ove granice, bakterije kvržica se obično više ne razmnožavaju, ali ipak ne umiru i mogu dugo ostati u neaktivnom stanju. Nedostatak vlage dovodi i do odumiranja već formiranih nodula.

Često se u područjima s nedostatkom vlage razvijaju mnoge mahunarke bez stvaranja kvržica.

Budući da se razmnožavanje kvržičnih bakterija ne događa u nedostatku vlage, u slučaju sušnog proljeća, inokulirano (vještački zaraženo) sjeme se mora uneti dublje u tlo. Na primjer, u Australiji se sjeme obloženo bakterijama nodula zakopava duboko u tlo. Zanimljivo je da su bakterije nodula u tlima sušne klime otpornije na sušu od bakterija u tlima vlažne klime. To pokazuje njihovu ekološku prilagodljivost.

Višak vlage, kao i njen nedostatak, također je nepovoljan za simbiozu - zbog smanjenja stupnja aeracije u zoni korijena, dotok kisika u korijenski sistem biljke pogoršava. Nedovoljna aeracija također negativno utječe na bakterije nodula koje žive u tlu, koje se, kao što znate, bolje razmnožavaju kada je kisik dostupan. Ipak, visoka aeracija u zoni korijena dovodi do činjenice da molekularni reduktori dušika počinju vezivati ​​kisik, smanjujući stupanj fiksacije dušika kvržica.

Temperaturni faktor igra važnu ulogu u odnosu između kvržičnih bakterija i mahunarki. Temperaturne karakteristike različitih vrsta mahunarki su različite. Također, različiti sojevi kvržičnih bakterija imaju svoje specifične temperaturne optimume za razvoj i aktivnu fiksaciju dušika. Treba napomenuti da se optimalne temperature za razvoj mahunarki, formiranje kvržica i fiksaciju dušika ne poklapaju. Dakle, u prirodnim uvjetima, formiranje nodula može se primijetiti na temperaturama nešto iznad 0 °C, fiksacija dušika se praktički ne događa u takvim uvjetima. Možda samo arktičke simbiotske mahunarke fiksiraju dušik na vrlo niskim temperaturama. Obično se ovaj proces odvija samo na 10 °C i više. Maksimalna fiksacija dušika kod određenog broja mahunarki uočava se na 20-25 °C. Temperature iznad 30 °C negativno utiču na proces akumulacije azota.

Ekološka adaptacija na temperaturni faktor kod kvržičnih bakterija je mnogo manja nego kod mnogih tipičnih saprofitskih oblika. Prema E. N. Mishustinu (1970), to je zbog činjenice da su prirodno stanište kvržičnih bakterija biljna tkiva, gdje temperaturne uvjete regulira biljka domaćin.

Reakcija tla ima veliki utjecaj na vitalnu aktivnost nodulnih bakterija i stvaranje kvržica. Za različite vrste, pa čak i sojeve bakterija nodula, pH vrijednost staništa je nešto drugačija. Na primjer, bakterije kvržica djeteline su otpornije na niske pH vrijednosti od bakterija kvržica lucerne. Očigledno, tu utiče i prilagođavanje mikroorganizama na okolinu. Detelina raste na kiselijim zemljištima od lucerne. Reakcija tla kao ekološki faktor utječe na aktivnost i virulentnost nodulnih bakterija. Najaktivnije sojeve je lakše izolirati iz tla s neutralnim pH vrijednostima. U kiselim tlima češći su neaktivni i slabo virulentni sojevi. Kisela sredina (pH 4,0-4,5) ima direktan učinak na biljke, posebno remeteći sintetičke procese metabolizma biljaka i normalan razvoj korijenskih dlačica. U kiseloj sredini u inokuliranim biljkama, period funkcioniranja bakteroidnog tkiva naglo se smanjuje, što dovodi do smanjenja stupnja fiksacije dušika.

U kiselim tlima, kako je primetio A. V. Peterburgski, soli aluminijuma i mangana prelaze u rastvor zemljišta, što negativno utiče na razvoj korenovog sistema biljaka i na proces asimilacije azota, kao i na sadržaj asimilabilnih oblika fosfora, kalcijuma, molibdena. a smanjuje se i ugljični dioksid. Nepovoljna reakcija tla najbolje se eliminira vapnenjem.

Veličina simbiotske fiksacije dušika u velikoj je mjeri određena nutritivnim uvjetima biljke domaćina, a ne bakterijama kvržica. Kvržice kao endotrofni simbionti biljaka uglavnom zavise od biljke za dobivanje tvari koje sadrže ugljik i mineralnih hranjiva.

Za bakterije kvržice tkivo domaćina je takav hranljivi medij koji može zadovoljiti i najzahtjevnije sojeve zbog sadržaja svih vrsta nutrijenata u tkivu. Ipak, nakon unošenja bakterija kvržica u tkivo biljke domaćina, njihov razvoj je određen ne samo unutarnjim procesima, već uvelike ovisi i o djelovanju vanjskih faktora koji utječu na cjelokupni tok infektivnog procesa. Sadržaj ili odsustvo jednog ili drugog nutrijenta u okolini može biti odlučujući trenutak za manifestaciju simbiotske fiksacije dušika.

Stepen snabdijevanja biljaka mahunarki dostupnim oblicima mineralnih azotnih jedinjenja određuje efikasnost simbioze. Na osnovu brojnih laboratorijskih i vegetativnih eksperimenata, poznato je da što je više spojeva koji sadrže dušik u okolišu, bakterijama je teže prodrijeti u korijen.

Poljoprivredna praksa zahtijeva nedvosmisleno rješenje problema - svrsishodnije je gnojiti mahunarke dušikom, ili su u pravu oni istraživači koji tvrde da mineralni dušik potiskuje simbiotsku fiksaciju dušika mahunarki i stoga je ekonomski isplativije takve biljke ne gnojiti nitrogen. Na Odsjeku za agronomsku i biološku hemiju Moskovske poljoprivredne akademije. K. A. Timiryazev je proveo eksperimente čiji su rezultati omogućili da se dobije slika ponašanja simbionta u uvjetima vegetacije i poljskih eksperimenata kada su biljke bile opskrbljene različitim dozama dušika u okolišu. Utvrđeno je da povećanje sadržaja rastvorljivih spojeva koji sadrže azot u životnoj sredini u poljskim uslovima i optimalnim uslovima rasta biljaka ne sprečava njihovu simbiozu sa kvržičnim bakterijama. Smanjenje udjela atmosferskog dušika koji asimiliraju biljke uz povećanu zalihu mineralnog dušika ima samo relativni karakter. Apsolutna količina dušika koji bakterije asimiliraju iz atmosfere praktički se ne smanjuje, a čak se i povećava u usporedbi s biljkama koje se uzgajaju uz prisustvo kvržičnih bakterija, ali bez unošenja dušika u tlo.

Od velikog značaja za aktiviranje apsorpcije azota mahunarkama je ishrana fosforom. Pri niskom sadržaju fosfora u mediju, bakterije prodiru u korijen, ali se ne stvaraju kvržice. Mahunarke imaju neke posebnosti u razmjeni spojeva koji sadrže fosfor. Sjemenke mahunarki su bogate fosforom. Rezervni fosfor pri klijanju semena ne koristi se na isti način kao kod drugih useva – relativno ravnomerno za formiranje svih organa, ali je u većoj meri koncentrisan u korenu. Stoga, u ranim fazama razvoja, mahunarke, za razliku od žitarica, svoje potrebe za fosforom u većoj mjeri zadovoljavaju na račun kotiledona, a ne rezervi tla. Što je seme veće, to manje mahunarke zavise od fosfora u zemljištu. Međutim, u simbiotskom načinu postojanja, potreba za fosforom u mahunarkama je veća nego u autotrofnom načinu. Stoga se s nedostatkom fosfora u mediju inokuliranih biljaka pogoršava opskrba biljaka dušikom.

Poznato je da mahunarke nose znatno više kalijuma sa svojim usjevima od drugih poljoprivrednih kultura. Stoga, potaša, a posebno fosforno-kalijumska gnojiva značajno povećavaju produktivnost fiksacije dušika mahunarkama.

Pozitivan učinak kalija na stvaranje kvržica i intenzitet fiksacije dušika u velikoj je mjeri povezan s fiziološkom ulogom kalija u metabolizmu ugljikohidrata biljke.

Kalcij je potreban ne samo za uklanjanje prekomjerne kiselosti tla. Ima specifičnu ulogu u razvoju bakterija kvržica i u osiguravanju normalne simbioze bakterija s biljkom domaćinom. Potreba nodulnih bakterija za kalcijem može se djelomično nadoknaditi stroncijumom. Zanimljivo je da bakterije kvržica tropskih usjeva koje rastu na kiselim lateritnim tlima ne zahtijevaju kalcij. Ovo opet pokazuje ekološku adaptaciju bakterija nodula, budući da tropska tla sadrže vrlo male količine kalcija.

Simbiotska fiksacija dušika također zahtijeva magnezijum, sumpor i željezo. S nedostatkom magnezija, reprodukcija nodulnih bakterija je inhibirana, njihova vitalna aktivnost se smanjuje, a simbiotska fiksacija dušika je potisnuta. Sumpor i željezo također imaju blagotvoran učinak na stvaranje čvorova i proces fiksacije dušika, posebno igrajući nesumnjivu ulogu u sintezi leghemoglobina.

Od elemenata u tragovima posebno ističemo ulogu molibdena i bora. Uz nedostatak molibdena, čvorići se slabo formiraju, u njima je poremećena sinteza slobodnih aminokiselina, a sinteza leghemoglobina je potisnuta. Molibden, zajedno sa ostalim elementima promjenjive valence (Fe, Co, Cu) služi kao posrednik u prijenosu elektrona u redoks enzimskim reakcijama. S nedostatkom bora, vaskularni snopovi se ne formiraju u čvorovima, a kao rezultat toga, razvoj bakteroidnog tkiva je poremećen.

Na stvaranje kvržica u mahunarkama veliki utjecaj ima metabolizam ugljikohidrata u biljkama, koji je određen brojnim faktorima: fotosintezom, prisustvom ugljičnog dioksida u okolišu i fiziološkim karakteristikama biljaka. Poboljšanje prehrane ugljikohidratima ima pozitivan učinak na proces inokulacije i akumulaciju dušika. Sa praktične tačke gledišta, upotreba slame i svježeg stajnjaka od slame za gnojidbu mahunarki kao izvora ugljikohidrata je od velikog interesa. Ali u prvoj godini nakon unošenja slame u tlo, otrovne tvari se akumuliraju tokom njenog raspadanja. Treba napomenuti da nisu sve vrste mahunarki osjetljive na toksične produkte raspadanja slame; grašak, na primjer, ne reagira na njih.

Biološki faktori igraju određenu ulogu u simbiozi bakterija kvržica i mahunarki.

Velika se pažnja poklanja utjecaju mikroflore rizosfere na bakterije nodula korijena, koji mogu biti i stimulativni i antagonistički, ovisno o sastavu mikroorganizama rizosfere.

Mnogi radovi su posvećeni proučavanju faga bakterija nodula. Većina faga je sposobna da lizira različite vrste bakterija; neki su specijalizirani samo u odnosu na pojedinačne vrste ili čak sojeve nodulnih bakterija. Fagi mogu spriječiti unošenje bakterija u korijen, uzrokovati lizu stanica u tkivu nodula. Fagi nanose veliku štetu liziranjem preparata nodulnih bakterija u biljkama koje proizvode nitragin.

Među raznim vrstama insekata koji oštećuju bakterije kvržica, ističe se prugasti kvržica, čije ličinke uništavaju kvržice na korijenu mnogih vrsta mahunarki (uglavnom jednogodišnjih). Rasprostranjen je i čekinjasti žižak.

U rano proleće ženke nodulesnog žižaka polažu 10 do 100 jaja. Nakon 10-15 dana iz jaja se razvijaju male (do 5,5 mm), crvolike, savijene, bijele larve svijetlosmeđe glave koje se hrane uglavnom kvržicama i korijenskim dlačicama. Novoizlegle ličinke prodiru u kvržicu i hrane se njenim sadržajem. Starije larve uništavaju nodule izvana. Jedna larva uništi 2-6 nodula za 30-40 dana. Posebno veliku štetu nanose u suhom i vrućem vremenu, kada se razvoj biljaka usporava.

Kvržice lucerne i nekih drugih vrsta mahunarki također oštećuje veliki lucerni žižak.

Ženke kornjaša polažu do 400 jaja, iz kojih se razvijaju beznoge, lučne, žućkastobijele, sa smeđom glavom, larve prekrivene smeđim čekinjama. Njihova dužina je 10-14 mm. Ciklus razvoja velikog žižaka lucerne traje dvije godine.

U stepskim krajevima, stepska nematoda je pronađena na korijenu lucerke, djeteline i soje. Prije polaganja jaja, ženke prodiru u korijen, gdje polažu od 12 do 20 jaja. U korijenu, ličinke prolaze kroz tri larvalne faze razvoja, narušavajući funkcije korijena i nodula.

Rasprostranjenost nodulnih bakterija u prirodi. Kao simbiotski organizmi, kvržične bakterije se šire u tlu, prateći određene vrste mahunarki. Nakon uništenja kvržica, stanice kvržičnih bakterija ulaze u tlo i počinju postojati na račun raznih organskih tvari, poput drugih mikroorganizama tla. Gotovo sveprisutna rasprostranjenost bakterija kvržica dokaz je njihove visoke prilagodljivosti različitim zemljišnim i klimatskim uvjetima, sposobnosti vođenja simbiotičkog i saprofitnog načina života.

Šematizirajući trenutno dostupne podatke o rasprostranjenosti nodulnih bakterija u prirodi, možemo napraviti sljedeće generalizacije.

U netaknutim i kultivisanim tlima obično su u velikim količinama prisutne kvržice onih vrsta mahunarki koje se nalaze u divljoj flori ili se dugo uzgajaju na određenom području. Broj bakterija kvržica uvijek je najveći u rizosferi mahunarki, nešto manji u rizosferi drugih vrsta, a malo je u tlu udaljenom od korijena.

U tlu se nalaze i efikasne i neefikasne bakterije nodula. Postoje brojni dokazi da dugotrajno saprofitsko postojanje bakterija kvržica, posebno u tlima s nepovoljnim svojstvima (kisela, slana), dovodi do smanjenja, pa čak i gubitka aktivnosti bakterija.

Unakrsna infekcija različitih vrsta mahunarki često u prirodi i poljoprivrednoj praksi dovodi do pojave kvržica na korijenu koje ne fiksiraju aktivno molekularni dušik. To, u pravilu, ovisi o odsustvu odgovarajućih vrsta nodulnih bakterija u tlu.

Ova pojava se posebno često uočava kada se koriste nove vrste mahunarki, koje su ili zaražene neefikasnim vrstama unakrsnih bakterija ili se razvijaju bez nodula.

Kvržice u biljkama koje nisu mahunarke.

Kvržice korijena ili formacije koje nalikuju kvržicama rasprostranjene su na korijenu ne samo mahunarki. Nalaze se kod golosjemenjača i kritosjemenjača.

Postoji do 200 vrsta raznih biljaka koje vežu dušik u simbiozi s mikroorganizmima koji formiraju kvržice na svom korijenu (ili lišću).

Kvržice golosjemenjača (redovi Cycadales - cicads, Ginkgoales - giikgovye, Coniferales - crnogorične) imaju razgranati koraljni, sferni ili perlasti oblik. Oni su zadebljani, modificirani bočni korijeni. Priroda patogena koji uzrokuje njihovo stvaranje još nije razjašnjena. Endofiti golosemenjača klasifikovani su kao gljive (fikomicete), aktinomicete, bakterije i alge. Neki istraživači sugeriraju postojanje višestruke simbioze. Na primjer, vjeruje se da Azotobacter, nodule bakterije i alge učestvuju u simbiozi kod cikasa. Također, nije riješeno pitanje funkcije nodula kod golosjemenjača. Brojni naučnici pokušavaju, prije svega, potkrijepiti ulogu nodula kao fiksatora dušika. Neki istraživači smatraju da su kvržice podokarpa rezervoari vode, a kvržice cikasa često se pripisuju funkcijama zračnog korijena.

Kod brojnih predstavnika kritosjemenjača, dikotiledonih biljaka, nodule na korijenu otkrivene su prije više od 100 godina.

Najprije se zadržimo na karakteristikama nodula drveća, grmlja i polugrmlja (porodice Coriariacoae, Myricaceae, Betulaceae, Casuarinaceae, Elaeagnaceae, Rhamnaceae) uključenih u ovu grupu. Čvorovi većine predstavnika ove grupe su grozdovi ružičasto-crvene boje nalik koralju, koji s godinama dobijaju smeđu boju. Postoje dokazi o prisustvu hemoglobina u njima. Kod vrsta iz roda Elaeagnus (loch) kvržice su bijele boje.

Često su noduli veliki. U kasuarini (Casuarina) dostižu dužinu od 15 cm. Funkcioniraju nekoliko godina.

Biljke s nodulama uobičajene su u različitim klimatskim zonama ili ograničene na određeno područje. Dakle, Shepherdia i Ceanothus se nalaze samo u Sjevernoj Americi, Casuarina - uglavnom u Australiji. Lokhovy i morska krkavina mnogo su rasprostranjeniji.

Mnoge biljke iz razmatrane grupe rastu na tlima siromašnim nutrijentima - pijesci, dine, stijene, močvare.

Najdetaljnije su istražene nodule johe (Alnus), posebno A. glutinosa, koje je 70-ih godina prošlog stoljeća otkrio M. S. Voronin (Sl. 167). Postoji pretpostavka da su nodule karakteristične ne samo za moderne, već i za izumrle vrste johe, budući da su pronađene na korijenima fosilne johe u tercijarnim naslagama doline rijeke Aldane - u Jakutiji.

Endofit u nodulama je polimorfan. Obično se javlja kao hife, vezikule i bakteroidi (slika 168). Taksonomski položaj endofita još nije utvrđen, jer su se brojni pokušaji da se izolira u čistu kulturu pokazali bezuspješnim, a ako je bilo moguće izolirati kulture, ispostavilo se da nisu virulentne.

Glavni značaj ove grupe biljaka, očigledno, leži u sposobnosti fiksiranja molekularnog dušika u simbiozi s endofitom. Uzgajajući u područjima gdje uzgoj poljoprivrednog bilja nije ekonomski racionalan, oni igraju ulogu pionira u razvoju zemljišta. Tako godišnji porast azota u tlu dina Irske (El Zelenortska ostrva) pod zasadima Casuarina equisetifolia dostiže 140 kg/ha. Sadržaj azota u zemljištu pod jovom je 30-50% veći nego u zemljištu breze, bora i vrbe. U osušenom lišću johe dušika je dvostruko više nego u listovima drugih drvenastih biljaka. Prema proračunima A. Virtanena (1962), gaj johe (prosječno 5 biljaka na 1 m2) daje povećanje dušika od 700 kg/ha za 7 godina.

Noduli su mnogo rjeđi kod predstavnika porodice Zygophyllaceae (parnofilnih). Prvi ih je otkrio B. L. Isachenko (1913) na korijenskom sistemu Tribulus terrestris. Kasnije su nodule pronađene i kod drugih vrsta Tribulusa.

Većina članova porodice Zygophyllaceae su kserofitni grmovi ili višegodišnje biljke. Uobičajene su u pustinjama tropskih i suptropskih regija, a rastu na pješčanim dinama, pustinjama i umjerenim močvarama.

Zanimljivo je primijetiti da tropske biljke poput svijetlocrvenog parofiluma stvaraju kvržice samo pri visokim temperaturama i niskoj vlažnosti tla. Vlažnost tla do 80% ukupnog vlažnog kapaciteta sprječava nastanak kvržica. Kao što je poznato, obrnuti fenomen se opaža kod mahunarki umjerene klime. Uz nedovoljnu vlagu, ne stvaraju kvržice.

Kvržice u biljkama porodice parnofilnih razlikuju se po veličini i položaju na korijenskom sistemu. Velike kvržice obično se razvijaju na glavnom korijenu i blizu površine tla. Manji se nalaze na bočnim korijenima i na većim dubinama. Ponekad se na stabljikama formiraju nodule ako leže na površini tla.

Kvržice kopnenog tribulusa na pijesku duž Južnog Buga izgledaju kao male bijele, blago šiljaste ili okrugle bradavice.

Obično su prekrivene pleksusom gljivičnih hifa koje prodiru u koru korijena.

U svijetlocrvenom parnolistniku kvržice su krajnja zadebljanja bočnih korijena biljaka. Bakteroidi se nalaze u čvorovima; bakterije su vrlo slične korijenskim nodulama.

Kvržice tropskih biljaka Tribulus cistoides su tvrde, zaobljene, prečnika oko 1 mm, širokom bazom spojene sa korijenom, često namotane na starim korijenima. Češće se nalazi na korijenu, naizmjenično, s jedne ili obje strane (Sl. 169). Nodule karakterizira odsustvo meristemske zone. Sličan fenomen se bilježi prilikom formiranja kvržica u crnogoričnim biljkama. Čvor stoga nastaje zbog diobe ćelija periciklusa stele.

Histološko istraživanje nodula Tribulus cistoides u različitim fazama razvoja pokazalo je da im nedostaje mikroorganizama. Na osnovu toga, kao i nakupljanja velikih količina škroba u kvržicama, smatraju se formacijama koje obavljaju funkciju opskrbe biljkama rezervnim hranjivim tvarima.

Kvržice šumske trske su sferične ili nešto izdužene formacije do 4 mm u prečniku, čvrsto sjede na korijenu biljaka (Sl. 170). Boja mladih kvržica je najčešće bijela, povremeno ružičasta, stara - žuta i smeđa. Čvor je širokim vaskularnim snopom povezan sa centralnim cilindrom korijena. Kao i kod Tribulus cistoides, kvržice trske imaju koru, parenhim kore, endoderm, periciklični parenhim i vaskularni snop (Sl. 171).

Bakterije u kvržicama drvene trske veoma podsjećaju na bakterije korijenskih nodula mahunarki.

Nodule se nalaze na korijenu kupusa i rotkvice - predstavnika porodice krstaša. Pretpostavlja se da ih formiraju bakterije koje imaju sposobnost da vežu molekularni dušik.

Među biljkama porodice madder, nodule se nalaze u kafi Coffea robusta i Coffea klainii. Granaju se dihotomno, ponekad spljoštene i izgledaju kao lepeza. Bakterije i bakteroidne ćelije nalaze se u tkivima nodula. Bakterije, prema Stewartu (1932), pripadaju Rhizobiumu, ali ih je nazvao Bacillus coffeicola.

Na drijadi (trava jarebica) pronađene su nodule u biljkama porodice ruža. Dva druga člana ove porodice, Purshia tridentata i Cercocarpus betuloides, opisali su tipične koraljne nodule. Međutim, u literaturi nema podataka o strukturi ovih nodula i prirodi njihovog patogena.

Od porodice vrijeska može se spomenuti samo jedna biljka - medvjeđe uho (ili medvjeđe bobice) koje ima kvržice na korijenskom sistemu. Mnogi autori smatraju da se radi o ektotrofnoj mikorizi nalik koralima.

U monokotiledonim biljkama kritosjemenjača česte su nodule među predstavnicima porodice žitarica: livadski lisičji rep, livadska plava trava, sibirska dlakava i solončak dlakav. Na krajevima korijena nastaju kvržice; duguljaste su, zaobljene, vretenaste. U lisičjem repu mladi čvorići su svijetli, prozirni ili prozirni, koji s godinama postaju smeđi ili crni. Podaci o prisutnosti bakterija u ćelijama nodula su kontradiktorni.

Listne nodule.

Poznato je da preko 400 vrsta raznih biljaka formiraju kvržice na listovima. Najviše su proučavane nodule Pavetta i Psychotria. Nalaze se na donjoj površini listova duž glavne vene ili rasuti između bočnih vena, imaju intenzivnu zelenu boju. Kloroplasti i tanin su koncentrirani u nodulama. Starenjem se na nodusima često pojavljuju pukotine.

Formirani čvor je ispunjen bakterijama koje inficiraju listove biljke, očigledno u vrijeme klijanja sjemena. Prilikom uzgoja sterilnog sjemena ne pojavljuju se kvržice i biljke razvijaju hlorotične. Pokazalo se da bakterije izolirane iz lisnih čvorova Psychotria bacteriopbyla pripadaju rodu Klebsiella (K. rubiacearum). Bakterije fiksiraju dušik ne samo u simbiozi, već iu čistoj kulturi - do 25 mg dušika na 1 g upotrijebljenog šećera. Mora se pretpostaviti da oni igraju važnu ulogu u ishrani biljaka dušikom na neplodnom tlu. Postoji razlog za vjerovanje da oni opskrbljuju biljke ne samo dušikom, već i biološki aktivnim tvarima.

Ponekad se na površini listova mogu vidjeti sjajni filmovi ili raznobojne mrlje. Formiraju ih mikroorganizmi filosfere - posebna vrsta epifitskih mikroorganizama, koji su također uključeni u ishranu biljaka dušikom. Bakterije filosfere su pretežno oligonitrofili (žive na zanemarivim nečistoćama spojeva koji sadrže dušik u mediju i po pravilu fiksiraju male količine molekularnog dušika), koji su u bliskom kontaktu s biljkom.

Biološki enciklopedijski rječnik

Rod bakterija koje fiksiraju dušik koje stvaraju kvržice na korijenu mnogih mahunarki. Apsorbirajte atmosferski molekularni dušik i pretvorite ga u dušikove spojeve koje apsorbiraju biljke, a koje, zauzvrat, osiguravaju drugim biljkama ... ... Ekološki rječnik

Rod bakterija koje formiraju kvržice na korijenu mnogih mahunarki i fiksiraju molekularni dušik u zraku u uvjetima simbioze s biljkom. Ne formiraju spore, oni su aerobi. Obogatite tlo azotom. Pogledajte takođe Fiksacija azota… Veliki enciklopedijski rječnik

Poprečni presjek čvorića korijena soje. Bakterije, lat. Bradyrhizobium japonicum, sjeme korijenje i ulazi u simbiozu koja fiksira dušik. Nodule bakterije... Wikipedia - simbiontske bakterije koje se razvijaju na tkivima korijena mahunarki i nekih drugih biljaka, sposobne su vezati slobodni dušik iz zraka i učiniti ga dostupnim višim biljkama... Pojmovnik botaničkih termina

Žive na korijenu mahunarki. i na njima formiraju posebne kvržice, veličine od maka do pasulja i veće. K. b. su važan faktor u povećanju prinosa, jer uz njihovu pomoć rastu mahunarke. apsorbuju slobodni azot iz atmosfere... Poljoprivredni rječnik-priručnik

nodusne bakterije- (Rhizobium), rod aerobnih bakterija koje se naseljavaju u kvržice na korijenu mahunarki i imaju sposobnost apsorpcije atm. dušikom i njime obogatiti tlo. Žive u simbiozi s biljkama, dajući im dušik i primajući proizvode ugljika od ranih ... Poljoprivredni enciklopedijski rječnik

nodusne bakterije- (Rhizobium), rod aerobnih bakterija koje se naseljavaju u kvržice na korijenu mahunarki i imaju sposobnost da apsorbuju atmosferski dušik i njime obogaćuju tlo. Žive u simbiozi sa biljkama, obezbeđujući im azot i primajući od biljaka ... ... Poljoprivreda. Veliki enciklopedijski rečnik

Prve bakterije u tlu koje je čovječanstvo primijetilo bile su bakterije nodule. Od 13 hiljada biljaka oko 1300 formira nodule, a 200 se koristi u poljoprivredi. Sve imaju funkciju fiksiranja atmosferskog azota. U tlu na kvržici se naseljavaju i razmnožavaju mikroorganizmi - simbionti koji zamjenjuju gnojiva.

Šta je kvržica

Prije više od 2000 godina farmeri su primijetili da siromašno, iscrpljeno tlo daje usjeve nakon uzgoja mahunarki na njima. Sljedeći pokušaji otkrivanja tajne bili su 1838: J.-B. Boussengo je odlučio da listovi mahunarki fiksiraju dušik, ali eksperimenti s nepovoljnim vodenim okolišem to nisu potvrdili. 1901. godine otkriven je Azotobacter chroococcum (6 vrsta iz roda Azotobacter). Prvi lijek na bazi "zemljane" bakterije Nitragin stvoren je 1897. godine.

Sve bakterije nodula su mikroaerofili. Imaju štapićasti/ovalni oblik. Rhizobium (Rhizobiales) spada u one sposobne da pretvore gasoviti oblik azota u biljci asimilirani - rastvorljiv. Podaci:

1. Prema mjeri u kojoj mikroorganizmi utječu na usjev, dijele se na aktivne (efikasno obogaćuju tlo), neaktivne i neaktivne (neefikasne).
2. Kada nema vlage, ne razmnožavaju se, stoga se u suhoj klimi posebno zaražene biljke unose dublje u tlo.
3. Optimalna temperatura za reprodukciju svih predstavnika organizama koji fiksiraju dušik je 20-30°C, ali se rast nastavlja na 0-35°C. Najbolja sredina (pH) je neutralna, oko 6,5-7,1, ali kisela uzrokuje smrt kolonija.
4. Zahvaljujući eksperimentima Moskovske poljoprivredne akademije, pokazalo se da čak i u nedostatku "donatora", bakterijski materijal ne napušta tlo do 50 godina.
5. Mikroorganizmi su u stanju da prežive čak i uslove nakon atomske eksplozije, izdrže gama zračenje i ultraljubičasto, sunčevo zračenje, ali ne mogu da žive na visokim temperaturama.
6. Mikroorganizmi su od najveće važnosti za razvoj korijena.

Uloga nodulnih bakterija u prirodi

Osim fiksacije atmosferskog dušika, uloga nodulnih bakterija u prirodi je vrlo velika. U procesu razmnožavanja se "uključuju" u sintezu vitamina, prirodnih antibiotika i doprinose razvoju prvo korijena, a potom i vrhova. Prednost leži u činjenici da bakterije tla tipa koji fiksiraju dušik zbog simbioze s biljkama:

• deo su ciklusa materija - azot;
• sintetiziraju fitohormone koji stimuliraju rast biljaka;
• može se koristiti kao način samopročišćavanja tla kontaminiranih teškim metalima pod faktorima mineralizacije (prirodni/preduzeća);
• razgrađuju neka jedinjenja koja sadrže hlor.

Mahunarke i kvržice

• kroz oštećenje tkiva
• prodiranje kroz korijenske dlačice;
• prodiranje kroz mlade vrhove korijena;
• zahvaljujući pratećim bakterijama.

Simbiotske bakterije roda Rhizobium, prodirući u korijen, kreću se u njegova tkiva, lako prevladavajući međućelijski prostor u grupama ili pojedinačnim stanicama (kao kod lupine). Češće, tokom reprodukcije, ćelija formira infektivne niti (pramenove, kolonije). Njihov broj varira u zavisnosti od vrste biljke. Često postoje zajedničke niti infekcije, koje formiraju jedan čvor.

Fiksacija dušika bakterijama

Vrijednost koju fiksacija dušika bakterijama predstavlja je ogromna: ona ne samo da obnavlja tlo, već vam omogućava da dobijete bogatije usjeve nego s humusom ili kemijskim gnojivima. Postoji interakcija između tvari i fiksatora dušika:

• u Azotobacteru („autonomno“, ne zahtijeva prisustvo biljke) - enzimima, zbog kisika u ćeliji;
• u Rhizobium (kvržice) - samo u prisustvu magnezijuma, sumpora, gvožđa.

Rasprostranjenost nodulnih bakterija u prirodi

Kao simbiotski organizmi, kvržične bakterije se šire u tlu, prateći određene vrste mahunarki. Nakon uništenja kvržica, stanice kvržičnih bakterija ulaze u tlo i počinju postojati na račun raznih organskih tvari, poput drugih mikroorganizama tla. Gotovo sveprisutna rasprostranjenost bakterija kvržica dokaz je njihove visoke prilagodljivosti različitim zemljišnim i klimatskim uvjetima, sposobnosti vođenja simbiotičkog i saprofitnog načina života.

Šematizirajući trenutno dostupne podatke o rasprostranjenosti nodulnih bakterija u prirodi, možemo napraviti sljedeće generalizacije.

U netaknutim i kultivisanim tlima obično su u velikim količinama prisutne kvržice onih vrsta mahunarki koje se nalaze u divljoj flori ili se dugo uzgajaju na određenom području. Broj bakterija kvržica uvijek je najveći u rizosferi mahunarki, nešto manji u rizosferi drugih vrsta, a malo je u tlu udaljenom od korijena.

U tlu se nalaze i efikasne i neefikasne bakterije nodula. Postoje brojni dokazi da dugotrajno saprofitsko postojanje bakterija kvržica, posebno u tlima s nepovoljnim svojstvima (kisela, slana), dovodi do smanjenja, pa čak i gubitka aktivnosti bakterija.

Rice. 1 - Kvržice na korijenu johe (prema J. Beckingu)

Unakrsna infekcija različitih vrsta mahunarki često u prirodi i poljoprivrednoj praksi dovodi do pojave kvržica na korijenu koje ne fiksiraju aktivno molekularni dušik. To, u pravilu, ovisi o odsustvu odgovarajućih vrsta nodulnih bakterija u tlu.

Posebno se često ovaj fenomen uočava kada se koriste nove vrste mahunarki, koje su ili zaražene neefikasnim vrstama bakterija unakrsne grupe ili se razvijaju bez nodula.

Rice. 2 - Kvržice na korijenu tribulusa (prema O. Allenu)

Kvržice se koriste za industrijsku proizvodnju nitragina, koji se koristi za tretiranje sjemena mahunarki. Prvi ih je otkrio M. S. Voronin 1866. Kasnije ih je M. V. Beyerink (1888) izolovao u čistoj kulturi i detaljno proučio mikrobiolozi i fiziolozi. Bakterije ulaze u korijen mahunarki kroz korijensku dlaku i prodiru u unutrašnji integument korijena, u parenhim, uzrokujući pojačanu diobu i proliferaciju stanica. Na korijenu se formiraju ružne izrasline koje se nazivaju noduli ili nodule. U početku, bakterije apsorbiraju hranjive tvari biljke i donekle inhibiraju njen rast. Zatim, kako tkivo nodula raste, uspostavlja se simbioza između bakterija i viših biljaka. Bakterije dobijaju ugljičnu hranu (šećer) i minerale iz biljke, a zauzvrat joj daju azotna jedinjenja.

Kvržice se naseljavaju u tlu, razmnožavaju se i prodiru u ćelije korijena kroz rupe u korijenskim dlačicama mahunarki. U stanicama dolazi do pojačanog razmnožavanja kvržičnih bakterija, a paralelno s tim dolazi i do intenzivne diobe stanica korijena zaraženih nodulnim bakterijama.

Nodule bakterije opskrbljuju biljku mahunarki dušikom. Biljka koristi ovaj vezani dušik i zauzvrat opskrbljuje kvržične bakterije potrebnom organskom tvari koja sadrži ugljik. Nodule bakterije mogu koristiti različite šećere i alkohole kao izvor ugljika.

Nodule bakterije su mikroaerofili (razvijaju se s malim količinama kisika u okolišu), međutim, preferiraju aerobne uvjete. Nodule bakterije koje su izašle iz niti infekcije nastavljaju da se razmnožavaju u tkivu domaćina. Većina bakterija se razmnožava u citoplazmi ćelije, a ne u infekcijskoj niti. Najintenzivnije se razvijaju kada je reakcija tla blizu neutralne. Stoga je kod sjetve mahunarki na kiselim tlima, uz inokulaciju sjemena, potrebno i kalcnjenje tla. Inokulacija bez kamenca ima vrlo mali uticaj na prinos i sadržaj proteina.

Kvržice su sposobne, pod povoljnim uslovima, da akumuliraju do 200-300 kg/ha azota u jednoj sezoni.

Mlade bakterije kvržice u čistoj kulturi na hranljivim podlogama obično imaju štapićasti oblik (sl. 2, 3), veličina štapića je približno 0 5 - 0 9 X 1 2 - 3 0 μm, pokretne, množe se dijeljenjem

Osim bakterija kvržica, u tlu žive i drugi mikroorganizmi koji mogu asimilirati slobodni dušik iz zraka; ne žive na korijenju biljaka, već u njihovoj blizini. Sve ostale hranjive tvari potrebne ovim mikrobima apsorbiraju sami, a ne na račun biljnih sokova, kao što je svojstveno biljkama kvržica. Azotobacter je najvažniji mikroorganizam koji živi u tlu, sposoban asimilirati atmosferski dušik. Ove bakterije mogu živjeti u povoljnim uvjetima vlažnosti, dobrog protoka zraka, odgovarajuće temperature i kiselosti tla. Zahtjevi Azotobactera prema termičkom režimu i vlažnosti tla približno su isti kao i kod kultivisanih biljaka, ali je osjetljiviji na kiselost tla od većine biljaka.

A. A. Imšenecki.

Velika sovjetska enciklopedija. - M.: Sovjetska enciklopedija. 1969-1978 .

Pogledajte šta je "Nodule bakterija" u drugim rječnicima:

- (Rhizobium), rod bakterija koje fiksiraju dušik koje formiraju kvržice na korijenima mnogih drugih. mahunarke. Unutrašnji čvorovi K. b. asimilirati kažu. dušik, pretvarajući ga u spojeve koje apsorbiraju biljke, koje, zauzvrat, osiguravaju bakterijama ishranu ... Biološki enciklopedijski rječnik

Rod bakterija koje fiksiraju dušik koje stvaraju kvržice na korijenu mnogih mahunarki. Apsorbirajte atmosferski molekularni dušik i pretvorite ga u dušikove spojeve koje apsorbiraju biljke, a koje, zauzvrat, osiguravaju drugim biljkama ... ... Ekološki rječnik

Rod bakterija koje formiraju kvržice na korijenu mnogih mahunarki i fiksiraju molekularni dušik u zraku u uvjetima simbioze s biljkom. Ne formiraju spore, oni su aerobi. Obogatite tlo azotom. Pogledajte takođe Fiksacija azota… Veliki enciklopedijski rječnik

Nodule bakterije. Vidi rizobiju. (Izvor: "Engleski ruski eksplanatorni rečnik genetskih pojmova". Arefiev V.A., Lisovenko L.A., Moskva: Izdavačka kuća VNIRO, 1995.) ... Molekularna biologija i genetika. Rječnik.

nodusne bakterije- rhizobia Ekstenzivna, genetski heterogena (u vezi s tim, rod Rhyzobium je sada podijeljen u 3 4 nezavisna roda) grupa zemljišnih gram-negativnih mikroorganizama sposobnih za ulazak u unutarćelijsku simbiozu s mahunarkama i ... ... Priručnik tehničkog prevodioca

Poprečni presjek čvorića korijena soje. Bakterije, lat. Bradyrhizobium japonicum, sjeme korijenje i ulazi u simbiozu koja fiksira dušik. Nodule bakterije ... Wikipedia

Rod bakterija koje formiraju kvržice na korijenu mnogih mahunarki i fiksiraju molekularni dušik u zraku u uvjetima simbioze s biljkom. Ne formiraju spore, oni su aerobi. Obogatite tlo azotom. Vidi također fiksacija dušika. * * * Nodule bakterije… … enciklopedijski rječnik

nodusne bakterije- simbiontske bakterije koje se razvijaju na tkivima korijena mahunarki i nekih drugih biljaka, sposobne su vezati slobodni dušik iz zraka i učiniti ga dostupnim višim biljkama... Pojmovnik botaničkih termina

nodusne bakterije- (Rhizobium), rod aerobnih bakterija koje se naseljavaju u kvržice na korijenu mahunarki i imaju sposobnost apsorpcije atm. dušikom i njime obogatiti tlo. Žive u simbiozi s biljkama, dajući im dušik i primajući proizvode ugljika od ranih ... Poljoprivredni enciklopedijski rječnik

nodusne bakterije- (Rhizobium), rod aerobnih bakterija koje se naseljavaju u kvržice na korijenu mahunarki i imaju sposobnost da apsorbuju atmosferski dušik i njime obogaćuju tlo. Žive u simbiozi sa biljkama, obezbeđujući im azot i primajući od biljaka ... ... Poljoprivreda. Veliki enciklopedijski rečnik